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呆米11

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[交流] 【求助/交流】DNA連接前后大小一樣咋回事? 已有5人參與

各位蟲(chóng)友:我今天遇到一個(gè)問(wèn)題想向大家請(qǐng)教一下:

我做基因克隆,用引物擴(kuò)出來(lái)的片段是500bp,條帶很清楚,我用T4連接酶,用的DH5a感受態(tài)細(xì)胞,做的連接,連完后做菌液PCR,電泳結(jié)果是都是在500bp處,有很亮的條帶,如果連上了,條帶肯定會(huì)大個(gè)一百多,如果沒(méi)連上咋會(huì)有500的條帶呢? 想問(wèn)一下,這可能是什么原因? 謝謝!

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1樓 2010-08-02 21:56:20

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yujiaping1

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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你用的是通用引物檢測(cè)的，還是原來(lái)的PCR引物啊，要是原來(lái)的PCR引物，應(yīng)該就是500bp

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2樓2010-08-02 22:14:22

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被太陽(yáng)追逐

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最好是提個(gè)質(zhì)粒酶切或測(cè)序，個(gè)人感覺(jué)菌液或菌落pcr假陽(yáng)性會(huì)很高

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3樓2010-08-02 22:19:55

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xmasylm

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用的是什么引物做的pcr檢測(cè)，載體引物會(huì)大于500bp，如果是原片段引物就是500bp，建議lz做酶切鑒定，酶切比pcr可靠。

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4樓2010-08-02 23:20:52

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fungixx

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reasonspare(金幣+1):謝謝分享。 2010-08-03 05:52:49

我覺(jué)得應(yīng)該是對(duì)的，你拿原先500的片段做對(duì)照，電泳時(shí)間長(zhǎng)點(diǎn)，應(yīng)該能看出來(lái)的。
直接測(cè)序吧！

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幾年前踏上火車(chē)那一刻都還沒(méi)有意識(shí)到,從此故鄉(xiāng)只有冬夏,再無(wú)春秋

5樓2010-08-03 00:28:14

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我用的是通用引物M13 RV 做的菌液PCR

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6樓2010-08-03 09:27:09

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