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[交流]
【求助/交流】質(zhì)粒轉(zhuǎn)不進(jìn)農(nóng)桿菌 已有7人參與
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已經(jīng)做了幾次農(nóng)桿菌感受態(tài)了，可是還是轉(zhuǎn)不進(jìn)去質(zhì)粒。每次涂完板都長(zhǎng)的很少的菌落，鑒定后也沒有目的帶。有時(shí)候有目的帶搖起來(lái)的菌液有沒有目的帶。好不容易菌液有條帶，保種之后再搖就又沒有了。太折磨人了！哪位大俠能幫幫小弟，感激不盡啊~有沒有比較好農(nóng)桿菌感受態(tài)制備方法，是發(fā)根農(nóng)桿菌~ 謝謝啦 |
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周_yan
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你好，請(qǐng)問什么樣的特殊結(jié)構(gòu)可能會(huì)影響轉(zhuǎn)化呀？我也遇到一樣的問題，我的重組質(zhì)粒是直接合成的，包括一段啟動(dòng)子序列、一段目的基因序列、一段終止子序列，兩端有與載體上同樣的兩個(gè)酶切位點(diǎn)，其中目的基因序列轉(zhuǎn)錄的是非編碼RNA，會(huì)形成一種莖狀的結(jié)構(gòu)。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中克隆以后，陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子提質(zhì)粒，之后所提的質(zhì)粒就沒有辦法轉(zhuǎn)到農(nóng)桿菌當(dāng)中，篩不到菌。請(qǐng)老師指教，非常感謝。  |
10樓2015-08-10 22:00:15
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