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tianhang

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[交流] 【求助/交流】質(zhì)粒轉(zhuǎn)不進(jìn)農(nóng)桿菌已有7人參與

已經(jīng)做了幾次農(nóng)桿菌感受態(tài)了，可是還是轉(zhuǎn)不進(jìn)去質(zhì)粒。每次涂完板都長(zhǎng)的很少的菌落，鑒定后也沒(méi)有目的帶。有時(shí)候有目的帶搖起來(lái)的菌液有沒(méi)有目的帶。好不容易菌液有條帶，保種之后再搖就又沒(méi)有了。太折磨人了！哪位大俠能幫幫小弟，感激不盡啊~有沒(méi)有比較好農(nóng)桿菌感受態(tài)制備方法，是發(fā)根農(nóng)桿菌~
謝謝啦

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1樓 2010-08-09 17:39:05

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tianhang

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Originally posted by chengao001 at 2010-08-09 20:31:39:
質(zhì)粒丟失？我做轉(zhuǎn)化時(shí)感覺(jué)挺好轉(zhuǎn)的啊，平板上張得轉(zhuǎn)化子少，但是基本上都是需要的。

我覺(jué)得可能是感受態(tài)問(wèn)題，涂在板上的轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞的菌體很多，但是都沒(méi)有長(zhǎng)出單菌落，好像是成片的死菌一樣，偶爾長(zhǎng)出來(lái)的單菌落鑒定確不是，但是把單菌落挑起來(lái)用抗生素培養(yǎng)液搖菌，4~7天后再檢測(cè)卻為陽(yáng)性，但是繼代重新?lián)u又檢測(cè)不到陽(yáng)性條帶了……

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5樓2010-08-12 08:31:51

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chengao001

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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流

質(zhì)粒丟失？我做轉(zhuǎn)化時(shí)感覺(jué)挺好轉(zhuǎn)的啊，平板上張得轉(zhuǎn)化子少，但是基本上都是需要的。

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2樓2010-08-09 20:31:39

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周_yan

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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流

我前段時(shí)間也遇到了同樣的問(wèn)題，總是篩不出帶來(lái)，感覺(jué)總是轉(zhuǎn)不進(jìn)去；后來(lái)我又重新設(shè)計(jì)了一個(gè)引物與原來(lái)的不同的引物再篩就行了，發(fā)現(xiàn)前面篩的那些都是�？赡艿脑蚴寝D(zhuǎn)入農(nóng)桿菌之后原來(lái)的引物序列丟失了或者有特殊結(jié)構(gòu)使其不能配對(duì)。你可以試一試這個(gè)方法。

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3樓2010-08-10 10:56:09

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引用回帖:

Originally posted by 周_yan at 2010-08-10 10:56:09:
我前段時(shí)間也遇到了同樣的問(wèn)題，總是篩不出帶來(lái)，感覺(jué)總是轉(zhuǎn)不進(jìn)去；后來(lái)我又重新設(shè)計(jì)了一個(gè)引物與原來(lái)的不同的引物再篩就行了，發(fā)現(xiàn)前面篩的那些都是�？赡艿脑蚴寝D(zhuǎn)入農(nóng)桿菌之后原來(lái)的引物序列丟失了或者有特殊 ...

那么說(shuō)可能是引物的問(wèn)題？引物在檢測(cè)質(zhì)粒的時(shí)候好用，但是由于質(zhì)粒進(jìn)入農(nóng)桿菌后會(huì)產(chǎn)生變化？然后引物就不好用了么？請(qǐng)問(wèn)你后來(lái)重新設(shè)計(jì)的引物與原來(lái)的有什么不同？需要在哪些地方改進(jìn)？謝謝你的幫助哈~祝你試驗(yàn)成功~

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4樓2010-08-12 08:29:40

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