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xzd5517520銅蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于降落pcr的問題！ 已有4人參與
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| 請教各位大俠：什么時候要做降落pcr??還有就是在pcr儀上是怎么設(shè)計的？？求教！ |
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hongyuan1016
鐵蟲 (初入文壇)
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4樓2010-09-14 16:43:39
小小豆豆
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降落PCR，主要用于PCR的條件的優(yōu)化。在許多情況下引物的設(shè)計使得PCR難以進行，例如特異性不夠易錯配等。退火溫度過高會使PCR效率過低，但退火溫度過低則會使非特異擴增過多。這雖然可以通過反復(fù)嘗試來優(yōu)化，但費時費力。降落PCR提供了一個較為簡易的優(yōu)化方法。其原理大致是這樣的。首先在較高的溫度下擴增，此時雖然擴增效率低，但非特異擴增基本沒有。隨著退火溫度的降低，非特異擴增會逐步增多。但由于此時特異的擴增產(chǎn)物已經(jīng)達到一定的數(shù)量優(yōu)勢，因此會對非特異擴增產(chǎn)生強烈的競爭抑制，從而大幅提高PCR的特異性和效率。這一PCR技術(shù)已經(jīng)大量地進入醫(yī)療臨床應(yīng)用�，F(xiàn)在，以高通量PCR為基礎(chǔ)的檢測方法、如人的 HLA分型 大多采用這一技術(shù)。 一般的PCR儀上，都可以通過每一次循環(huán)降低一定退火溫度的方式來實現(xiàn)，具體的看一下儀器說明書就明白了，呵呵，不難的。  |
2樓2010-09-12 20:45:01
yujiaping1
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3樓2010-09-12 22:16:12
wjswj
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相比之下還是認為二樓的對。非特異的東西會越來越多，而不會被選擇掉，PCR的優(yōu)勢（可怕之處）就在于會幾何級的增加。 請參考：http://baike.baidu.com/view/2200786.html?tp=4_01 |
5樓2010-09-14 17:01:52
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