 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1086 | 回復(fù): 3 | |||||
liubin專家顧問 (著名寫手)
|
[交流]
【交流】SDS-PAGE
|
|
本人以前未做過SDS-PAGE ，操作中遇到很多問題，至今未解決。 我將實驗中遇到的問題，按時間順序匯報如下，請大家不吝賜教。情況如下： 我使用的是凱基生物的全套試劑盒，使用的電泳槽為：BIO-RAD MINI-PROTEAN... 1. 按說明書配制分離膠和濃縮膠，及其他試劑。 分離膠凝膠時間2h 電流：10MA/30MA. 電泳時間：10h 結(jié)果：樣品幾乎一直停留在點樣點一下2cm處。 2。 將4×Tris-HCl/SDS, pH8.8 及4×Tris-HCl/SDS, pH6.8 稀釋4倍使用 分離膠凝膠時間2h，剩余膠不凝，膠版內(nèi)膠似乎已經(jīng)凝固，故繼續(xù)后續(xù)過程。 電流：10MA/50MA. 電泳時間：4h 結(jié)果：樣品幾乎一直停留在點樣點一下2cm處。 檢查發(fā)現(xiàn)，上槽漏液，但液面停留在梳齒一下位置左右，原因：上槽短玻璃板處未卡緊。 處理好漏液后繼續(xù)電泳，電流：10MA，30min，跑膠完成，染色后有條帶 3。 重復(fù)以上步驟，電流：10/15/30MA，9h，染色后有條帶。 我認為，上述實驗均失敗，請大家?guī)兔φ乙幌略�。具體請教一下問題： 1） 是否要同時設(shè)定電流和電壓？國外的資料是以功率w 來表示的。 2） 4×Tris-HCl/SDS, pH8.8 及4×Tris-HCl/SDS, pH6.8 是否要進行稀釋？ 3）我使用的電泳儀是否有問題？ 等候賜教！ 萬分感謝！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
一志愿中山大學(xué)生物學(xué)，295分，求A區(qū)調(diào)劑
已經(jīng)有2人回復(fù)
-
求助化合物CD數(shù)據(jù)的處理
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
生物物理、生物化學(xué)與分子生物學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有196人回復(fù)
-
廣州醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)院 生物醫(yī)學(xué)工程工學(xué)-083100 招生
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿湖南大學(xué) 生物學(xué)332分 有國獎+省級
已經(jīng)有1人回復(fù)
-
美國南加大(USC)藥學(xué)院Prof. Yong (Tiger) Zhang課題組誠聘博士后
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程系課題組招收2026級食品/生物醫(yī)藥碩士生（含調(diào)劑）
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
2026年博士生自我推薦
已經(jīng)有1人回復(fù)
-
一志愿211生物學(xué)（0710）總分325求調(diào)劑
已經(jīng)有2人回復(fù)
-
求調(diào)劑推薦
已經(jīng)有2人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- SDS-PAGE 蛋白膠跑膠問題
已經(jīng)有27人回復(fù)
- 請大家?guī)兔Ψ治鱿挛业腟DS-PAGE蛋白檢測膠啊
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 關(guān)于SDS-PAGE電泳問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【轉(zhuǎn)】我在SDS-PAGE中所犯的錯誤，歡迎補充！
已經(jīng)有33人回復(fù)
- SDS-PAGE電泳求助
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 關(guān)于SDS-PAGE與雙向電泳的請教
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】SDS-PAGE電泳問題
已經(jīng)有38人回復(fù)
- 【求助/交流】SDS-PAGE凝膠電泳
已經(jīng)有33人回復(fù)
- 【求助/交流】SDS-PAGE跑不出帶
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 【求助/交流】請教，SDS-PAGE的問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
2樓2010-09-19 11:17:11
winter_gates
金蟲 (正式寫手)
生命過客
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1161.8
- 散金: 100
- 紅花: 1
- 帖子: 615
- 在線: 20.4小時
- 蟲號: 541629
- 注冊: 2008-04-08
- 專業(yè): 生物化學(xué)
★
liubin(金幣+1): 2010-09-19 14:44:35
americanyk(金幣+1):謝謝回帖交流 2010-09-19 09:40:00
liubin(金幣+1): 2010-09-19 14:44:35
americanyk(金幣+1):謝謝回帖交流 2010-09-19 09:40:00
|
要看你是什么樣品，樣品在緩沖液下是否有電離，如果是SDS-PAGE的話一般樣品是蛋白質(zhì)且表面的電荷是SDS給予的，我做蛋白樣品的時候，一般是設(shè)置電壓，積層膠一般50V20-25min，分離膠一般120V-180V，40min-1.5h。下面是我常用的buffer Tris-tricine電泳緩沖液： Cathode buffer 負極緩沖液：pH 8.25（可不調(diào)pH） Tris-Hcl 100 mM tricine 100 mM SDS 0.1% 500 ml：6.055g Tris + 8.96g Tricine + 0.5g SDS Anode buffer 正極緩沖液：pH8.9 Tris-Hcl 200 mM 1000 ml：24.22g Tris 額，寫到這，我知道你的問題了，電泳液…… |
3樓2010-09-19 11:21:41
dj04164
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 12 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.1
- 金幣: 2728.2
- 散金: 357
- 紅花: 7
- 帖子: 400
- 在線: 152小時
- 蟲號: 687713
- 注冊: 2009-01-04
- 專業(yè): 生物醫(yī)用高分子材料
4樓2010-09-19 20:58:28
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 liubin 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +4 | NIFFFfff 2026-03-20 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求助 +5 | 夢里的無言 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境總分308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | 某某某某位 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +5 | 紅衣隱官 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 279分求調(diào)劑 一志愿211 +14 | chaojifeixia 2026-03-19 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 310求調(diào)劑 +3 | baibai1314 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 機械專碩299求調(diào)劑至材料 +3 | kkcoco25 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 二本跨考鄭大材料306英一數(shù)二 +3 | z1z2z3879 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | ydfyh 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 華東師范大學(xué)-071000生物學(xué)-293分-求調(diào)劑 +3 | 研究生何瑤明 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +4 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +9 | 想上學(xué)吖吖 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩337求調(diào)劑 +3 | niko- 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +7 | ^O^乜 2026-03-19 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 353求調(diào)劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 18889395102 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +5 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | p asserby. 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|