 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1094 | 回復(fù): 3 | |||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||||
liubin專家顧問 (著名寫手)
|
[交流]
【交流】SDS-PAGE
|
||||
|
本人以前未做過SDS-PAGE ，操作中遇到很多問題，至今未解決。 我將實(shí)驗(yàn)中遇到的問題，按時(shí)間順序匯報(bào)如下，請(qǐng)大家不吝賜教。情況如下： 我使用的是凱基生物的全套試劑盒，使用的電泳槽為：BIO-RAD MINI-PROTEAN... 1. 按說明書配制分離膠和濃縮膠，及其他試劑。 分離膠凝膠時(shí)間2h 電流：10MA/30MA. 電泳時(shí)間：10h 結(jié)果：樣品幾乎一直停留在點(diǎn)樣點(diǎn)一下2cm處。 2。 將4×Tris-HCl/SDS, pH8.8 及4×Tris-HCl/SDS, pH6.8 稀釋4倍使用 分離膠凝膠時(shí)間2h，剩余膠不凝，膠版內(nèi)膠似乎已經(jīng)凝固，故繼續(xù)后續(xù)過程。 電流：10MA/50MA. 電泳時(shí)間：4h 結(jié)果：樣品幾乎一直停留在點(diǎn)樣點(diǎn)一下2cm處。 檢查發(fā)現(xiàn)，上槽漏液，但液面停留在梳齒一下位置左右，原因：上槽短玻璃板處未卡緊。 處理好漏液后繼續(xù)電泳，電流：10MA，30min，跑膠完成，染色后有條帶 3。 重復(fù)以上步驟，電流：10/15/30MA，9h，染色后有條帶。 我認(rèn)為，上述實(shí)驗(yàn)均失敗，請(qǐng)大家?guī)兔φ乙幌略�。具體請(qǐng)教一下問題： 1） 是否要同時(shí)設(shè)定電流和電壓？國外的資料是以功率w 來表示的。 2） 4×Tris-HCl/SDS, pH8.8 及4×Tris-HCl/SDS, pH6.8 是否要進(jìn)行稀釋？ 3）我使用的電泳儀是否有問題？ 等候賜教！ 萬分感謝！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院招收2026年考研調(diào)劑生
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院招收2026年考研調(diào)劑生
已經(jīng)有1人回復(fù)
-
生物力學(xué)與組織工程學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有244人回復(fù)
-
中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院招收2026年考研調(diào)劑生
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
提供獎(jiǎng)學(xué)金 ，西交利物浦大學(xué)劉波課題組招傳感器方向博士研究生
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
提供獎(jiǎng)學(xué)金 ，西交利物浦大學(xué)劉波課題組招傳感器方向博士研究生
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
340求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
大連工業(yè)大學(xué) 生物質(zhì)能源與材料專業(yè)招收調(diào)劑生，有興趣加聯(lián)系：15732893021
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
生物學(xué)308分求調(diào)劑（一志愿華東師大）
已經(jīng)有2人回復(fù)
-
求考研調(diào)劑推薦
已經(jīng)有1人回復(fù)
-
大連工業(yè)大學(xué) 生物質(zhì)能源與材料專業(yè)招收調(diào)劑生，有興趣加聯(lián)系：15732893021
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- SDS-PAGE 蛋白膠跑膠問題
已經(jīng)有27人回復(fù)
- 請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鱿挛业腟DS-PAGE蛋白檢測(cè)膠啊
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 關(guān)于SDS-PAGE電泳問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【轉(zhuǎn)】我在SDS-PAGE中所犯的錯(cuò)誤，歡迎補(bǔ)充！
已經(jīng)有33人回復(fù)
- SDS-PAGE電泳求助
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 關(guān)于SDS-PAGE與雙向電泳的請(qǐng)教
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】SDS-PAGE電泳問題
已經(jīng)有38人回復(fù)
- 【求助/交流】SDS-PAGE凝膠電泳
已經(jīng)有33人回復(fù)
- 【求助/交流】SDS-PAGE跑不出帶
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教，SDS-PAGE的問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
dj04164
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 12 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.1
- 金幣: 2728.2
- 散金: 357
- 紅花: 7
- 帖子: 400
- 在線: 152小時(shí)
- 蟲號(hào): 687713
- 注冊(cè): 2009-01-04
- 專業(yè): 生物醫(yī)用高分子材料
4樓2010-09-19 20:58:28
2樓2010-09-19 11:17:11
winter_gates
金蟲 (正式寫手)
生命過客
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1161.8
- 散金: 100
- 紅花: 1
- 帖子: 615
- 在線: 20.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 541629
- 注冊(cè): 2008-04-08
- 專業(yè): 生物化學(xué)
★
liubin(金幣+1): 2010-09-19 14:44:35
americanyk(金幣+1):謝謝回帖交流 2010-09-19 09:40:00
liubin(金幣+1): 2010-09-19 14:44:35
americanyk(金幣+1):謝謝回帖交流 2010-09-19 09:40:00
|
要看你是什么樣品，樣品在緩沖液下是否有電離，如果是SDS-PAGE的話一般樣品是蛋白質(zhì)且表面的電荷是SDS給予的，我做蛋白樣品的時(shí)候，一般是設(shè)置電壓，積層膠一般50V20-25min，分離膠一般120V-180V，40min-1.5h。下面是我常用的buffer Tris-tricine電泳緩沖液： Cathode buffer 負(fù)極緩沖液：pH 8.25（可不調(diào)pH） Tris-Hcl 100 mM tricine 100 mM SDS 0.1% 500 ml：6.055g Tris + 8.96g Tricine + 0.5g SDS Anode buffer 正極緩沖液：pH8.9 Tris-Hcl 200 mM 1000 ml：24.22g Tris 額，寫到這，我知道你的問題了，電泳液…… |
3樓2010-09-19 11:21:41
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 086000調(diào)劑 +5 | 7901117076 2026-03-26 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 085601英二數(shù)二求調(diào)劑 總分325 +4 | 余航航 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 286分調(diào)劑 +11 | Faune 2026-03-30 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 一志愿哈工大總分298分，前三科223分 +11 | dongfang59 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
[考研] 322求調(diào)劑：一志愿湖南大學(xué) 材料與化工（085600），已過六級(jí)。 +10 | XX小鄧 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 330分求調(diào)劑 +6 | qzenlc 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +8 | 愛羈絆 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 生物考研337分求調(diào)劑 +4 | cgxin 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
材料調(diào)劑
 5+5
|
想要一壺桃花水 2026-03-25 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑310 +13 | 溫柔的晚安 2026-03-25 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國科學(xué)院大學(xué)265求調(diào)劑 +6 | 恬淡ye 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +17 | land xuxu 2026-03-26 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +16 | kikiki7 2026-03-30 | 16/800 |
|
|
|
[考研]
 一志愿大連理工大學(xué)材料求調(diào)劑
+6
|
Gymno 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 337求調(diào)劑 +6 | 《樹》 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調(diào)劑 +8 | AZMK 2026-03-25 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京航空航天大學(xué)材料學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +4 | gajsj 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 錦衣衛(wèi)藤椒 2026-03-25 | 4/200 |
|