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lij2金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】引物設(shè)計(jì)。金幣可追加
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我要做熒光定量PCR,本想讓公司設(shè)計(jì)引物和探針,可現(xiàn)公司均只合成不設(shè)計(jì)。用primer express3設(shè)計(jì)出的引物和探針結(jié)果卻是: Forward Primer:CGGTACCACTAGTTCTAGAGAGCTCAA TM 60 Reverse Primer:TTGCTTTATCAACTGCTGCTTTTT TM 58 Probe:AAAACCAAGGCTTGAAAC TM 69 首先TM值跟我在NCBI上BLAST的差距甚遠(yuǎn),其次探針有點(diǎn)短,且離上游引物距離較長(zhǎng)。實(shí)在是不知道能不能用。還請(qǐng)高手指教。多謝~~~ |
銅蟲 (初入文壇)
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上海生工上海部就給設(shè)計(jì),我的就是在那里設(shè)計(jì)合成的。設(shè)計(jì)好后還需自己在blast上面比對(duì)。 我的是生工設(shè)計(jì)完成后用primer5及blast都檢測(cè)驗(yàn)證了,自己覺得好后才讓他們合成的,我做real-time PCR用過引物還不錯(cuò)。注意一定要自己比對(duì)驗(yàn)證。 |
木蟲 (著名寫手)
永遠(yuǎn)的菜鳥

金蟲 (小有名氣)
銅蟲 (初入文壇)
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不會(huì)吧,這么快就不給設(shè)計(jì)了,我那個(gè)是十一之前剛剛設(shè)計(jì)合成好的。 至于驗(yàn)證,我沒有做探針,只是做了引物。我是用primer5看看設(shè)計(jì)的引物有沒有發(fā)夾結(jié)構(gòu),引物間二聚體,錯(cuò)配什么的。用blast就是看看特異性高不高,結(jié)果中有個(gè)一條一條的圖,那個(gè)最好出現(xiàn)藍(lán)色條吧,并且是你需要的基因序列的代碼,盡量不要有其他基因代碼,藍(lán)條應(yīng)該是40多分。 |
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