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nestzhao木蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】求助幾個(gè)問(wèn)題
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各位,最近做雙酶切,有幾個(gè)問(wèn)題,向大家請(qǐng)教一下 1、提取質(zhì)粒時(shí),一般說(shuō)的“培養(yǎng)過(guò)夜”,這是一個(gè)什么概念,一般應(yīng)該培養(yǎng)多少小時(shí)為宜? 2、在一般的內(nèi)切酶說(shuō)明書(shū)中,一般都說(shuō)質(zhì)粒含量≤1μg,這個(gè)1μg是個(gè)什么概念,該怎么控制這個(gè)含量? 3、提完質(zhì)粒后,跑瓊脂糖凝膠電泳,條帶不是很亮,而且同時(shí)提幾管質(zhì)粒,有幾管有條帶,比較亮,有幾管卻沒(méi)有或暗很多,不知道是什么原因。質(zhì)粒時(shí)用試劑盒提的,操作都是同樣的,而且已經(jīng)不是一次出現(xiàn)這種情況了。 |

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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一般過(guò)夜培養(yǎng)的概念是12個(gè)小時(shí)左右,短的8小時(shí)就足夠了,不好的要16個(gè)小時(shí),這個(gè)要看張得顏色,我覺(jué)得是憑經(jīng)驗(yàn)來(lái)的 我覺(jué)得如果是酶切就檢驗(yàn)一下那也無(wú)所謂上樣量小于多少了,能切開(kāi)就行,如果是下游實(shí)驗(yàn)要求必須全部且完全,那可以延長(zhǎng)酶切時(shí)間,不過(guò)有些酶延長(zhǎng)時(shí)間容易產(chǎn)生星號(hào)活性,所以能延長(zhǎng)時(shí)間的酶就可以用延長(zhǎng)時(shí)間來(lái)使酶切徹底。 至于你第三個(gè)問(wèn)題俺就不知道是啥情況了。 |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

新蟲(chóng) (小有名氣)
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1、培養(yǎng)過(guò)夜一般是12個(gè)小時(shí),也分菌吧,大腸一般8h就可以了,谷氨酸棒桿菌說(shuō)的過(guò)夜培養(yǎng)一般為16h,你也可以根據(jù)菌濃來(lái)決定具體時(shí)間。 2、我知道有質(zhì)粒定量的,者應(yīng)該是個(gè)濃度單位,具體的也不太明白。 3、不知道你們實(shí)驗(yàn)室的其他同學(xué)也出現(xiàn)過(guò)你這種情況嗎,如果有的話(huà),可能就是試劑盒的問(wèn)題吧 |
新蟲(chóng) (小有名氣)
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1.培養(yǎng)過(guò)夜一般都是指12h。但培養(yǎng)時(shí)也不要太“本本主義”,要看菌液濃度,我用的都是大腸桿菌,一般搖到淺乳白色就行,這要憑經(jīng)驗(yàn)來(lái)辨別。搖菌所用的容器也有關(guān)系,三角瓶里長(zhǎng)的快,試管里慢。 2.DNA和RNA都可以用紫外分光光度計(jì)來(lái)測(cè)定其濃度的,測(cè)定得到的數(shù)據(jù)可以換算成μg/ml。 3.新提的質(zhì)粒跑電泳沒(méi)條帶,最大的可能就是沒(méi)有轉(zhuǎn)化成功或菌液污染?纯磁艹鰲l帶的菌液和沒(méi)有條帶的菌液顏色是否有區(qū)別。 |
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