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nestzhao木蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】求助幾個問題
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各位,最近做雙酶切,有幾個問題,向大家請教一下 1、提取質(zhì)粒時,一般說的“培養(yǎng)過夜”,這是一個什么概念,一般應(yīng)該培養(yǎng)多少小時為宜? 2、在一般的內(nèi)切酶說明書中,一般都說質(zhì)粒含量≤1μg,這個1μg是個什么概念,該怎么控制這個含量? 3、提完質(zhì)粒后,跑瓊脂糖凝膠電泳,條帶不是很亮,而且同時提幾管質(zhì)粒,有幾管有條帶,比較亮,有幾管卻沒有或暗很多,不知道是什么原因。質(zhì)粒時用試劑盒提的,操作都是同樣的,而且已經(jīng)不是一次出現(xiàn)這種情況了。 |

金蟲 (正式寫手)
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一般過夜培養(yǎng)的概念是12個小時左右,短的8小時就足夠了,不好的要16個小時,這個要看張得顏色,我覺得是憑經(jīng)驗(yàn)來的 我覺得如果是酶切就檢驗(yàn)一下那也無所謂上樣量小于多少了,能切開就行,如果是下游實(shí)驗(yàn)要求必須全部且完全,那可以延長酶切時間,不過有些酶延長時間容易產(chǎn)生星號活性,所以能延長時間的酶就可以用延長時間來使酶切徹底。 至于你第三個問題俺就不知道是啥情況了。 |
木蟲 (正式寫手)

新蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)
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1.培養(yǎng)過夜一般都是指12h。但培養(yǎng)時也不要太“本本主義”,要看菌液濃度,我用的都是大腸桿菌,一般搖到淺乳白色就行,這要憑經(jīng)驗(yàn)來辨別。搖菌所用的容器也有關(guān)系,三角瓶里長的快,試管里慢。 2.DNA和RNA都可以用紫外分光光度計(jì)來測定其濃度的,測定得到的數(shù)據(jù)可以換算成μg/ml。 3.新提的質(zhì)粒跑電泳沒條帶,最大的可能就是沒有轉(zhuǎn)化成功或菌液污染。看看跑出條帶的菌液和沒有條帶的菌液顏色是否有區(qū)別。 |
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