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nestzhao木蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】求助幾個(gè)問(wèn)題
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各位，最近做雙酶切，有幾個(gè)問(wèn)題，向大家請(qǐng)教一下 1、提取質(zhì)粒時(shí)，一般說(shuō)的“培養(yǎng)過(guò)夜”，這是一個(gè)什么概念，一般應(yīng)該培養(yǎng)多少小時(shí)為宜？ 2、在一般的內(nèi)切酶說(shuō)明書(shū)中，一般都說(shuō)質(zhì)粒含量≤1μg，這個(gè)1μg是個(gè)什么概念，該怎么控制這個(gè)含量？ 3、提完質(zhì)粒后，跑瓊脂糖凝膠電泳，條帶不是很亮，而且同時(shí)提幾管質(zhì)粒，有幾管有條帶，比較亮，有幾管卻沒(méi)有或暗很多，不知道是什么原因。質(zhì)粒時(shí)用試劑盒提的，操作都是同樣的，而且已經(jīng)不是一次出現(xiàn)這種情況了。 |
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hyy2005bne
新蟲(chóng) (小有名氣)
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★
dhd997(金幣+1):鼓勵(lì)交流。 2010-11-03 20:04:37
nestzhao(金幣+1): 2010-11-03 22:09:06
dhd997(金幣+1):鼓勵(lì)交流。 2010-11-03 20:04:37
nestzhao(金幣+1): 2010-11-03 22:09:06
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1、培養(yǎng)過(guò)夜一般是12個(gè)小時(shí)，也分菌吧，大腸一般8h就可以了，谷氨酸棒桿菌說(shuō)的過(guò)夜培養(yǎng)一般為16h，你也可以根據(jù)菌濃來(lái)決定具體時(shí)間。 2、我知道有質(zhì)粒定量的，者應(yīng)該是個(gè)濃度單位，具體的也不太明白。 3、不知道你們實(shí)驗(yàn)室的其他同學(xué)也出現(xiàn)過(guò)你這種情況嗎，如果有的話，可能就是試劑盒的問(wèn)題吧 |
5樓2010-11-03 20:01:10
amilie030312
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★
dhd997(金幣+1):謝謝交流。 2010-11-01 10:16:18
nestzhao(金幣+1): 2010-11-01 18:20:58
dhd997(金幣+1):謝謝交流。 2010-11-01 10:16:18
nestzhao(金幣+1): 2010-11-01 18:20:58
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一般過(guò)夜培養(yǎng)的概念是12個(gè)小時(shí)左右，短的8小時(shí)就足夠了，不好的要16個(gè)小時(shí)，這個(gè)要看張得顏色，我覺(jué)得是憑經(jīng)驗(yàn)來(lái)的 我覺(jué)得如果是酶切就檢驗(yàn)一下那也無(wú)所謂上樣量小于多少了，能切開(kāi)就行，如果是下游實(shí)驗(yàn)要求必須全部且完全，那可以延長(zhǎng)酶切時(shí)間，不過(guò)有些酶延長(zhǎng)時(shí)間容易產(chǎn)生星號(hào)活性，所以能延長(zhǎng)時(shí)間的酶就可以用延長(zhǎng)時(shí)間來(lái)使酶切徹底。 至于你第三個(gè)問(wèn)題俺就不知道是啥情況了。 |
2樓2010-11-01 09:48:46
fzfangtao
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3樓2010-11-01 16:55:08
4樓2010-11-01 18:52:08
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