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mmsong1987金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】請(qǐng)教試劑瓶等滅菌的包裝
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本人是學(xué)化學(xué)的，沒(méi)有接受過(guò)正規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)操作培訓(xùn)，想請(qǐng)教一些關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題，期生物的同學(xué)能給解答疑問(wèn)，多謝！ 1. 像玻璃培養(yǎng)瓶，藍(lán)蓋試劑瓶之類(lèi)的，高壓滅菌前要怎樣包裝呢？如果只是把瓶口稍微擰松讓蒸汽進(jìn)去等滅菌結(jié)束后直接把瓶蓋擰緊，那么瓶?jī)?nèi)蒸汽冷凝后形成的水珠怎么辦呢？放在鼓風(fēng)干燥箱里烘干的話怎么保證箱體內(nèi)的空氣不會(huì)導(dǎo)致滅過(guò)的瓶子二次污染呢？看到有人說(shuō)用8層紗布，要整體都包住嗎？這樣的話大的1L的藍(lán)蓋瓶豈不是要專門(mén)縫個(gè)紗布袋了？ 2. 分裝培養(yǎng)基的時(shí)候，是在過(guò)膜之前先用量筒分裝成200 mL等不同的體積后再過(guò)濾嗎？因?yàn)闉V過(guò)之后又要一批瓶子，這樣每次都要準(zhǔn)備兩個(gè)批量的瓶子，是這樣嗎？另外，把這些分裝好后的瓶子噴過(guò)酒精直接拿到超凈臺(tái)里進(jìn)行過(guò)濾操作，這樣打開(kāi)瓶口后，瓶?jī)?nèi)的細(xì)菌不就留在超凈臺(tái)內(nèi)了嗎？ 3. 那些國(guó)產(chǎn)的針頭濾器，據(jù)說(shuō)可以重復(fù)利用，是直接把微孔濾膜裝在濾器后用紗布之類(lèi)的包好放在滅菌鍋里滅菌，然后就可以直接濾胰酶之類(lèi)的了嗎？因?yàn)槭切率�，一切還在學(xué)習(xí)階段，實(shí)驗(yàn)室經(jīng)費(fèi)也不是很寬裕，不好意思剛開(kāi)始就拿那種無(wú)菌包裝的練習(xí)。 4. 四季青的血清要滅活嗎？看網(wǎng)上搜出來(lái)的結(jié)果是各式各樣的，我們主要是用來(lái)做傳代細(xì)胞的培養(yǎng)，大多是腫瘤細(xì)胞。 5. 細(xì)胞凍存是不是只在-80度冰箱就可以短期保存，比如2~3個(gè)月之久。凍存細(xì)胞的液氮罐記得都有能放凍存管的格子，跟化學(xué)用的不大一樣，應(yīng)該買(mǎi)什么樣的液氮罐啊，什么廠家產(chǎn)的好呢？ |
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 細(xì)胞 |
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Rubisco580
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lstt09nk(金幣+5):感謝回復(fù)，歡迎常來(lái)生物版做客 2010-11-22 16:54:14
mmsong1987(金幣+10):謝謝，以后還請(qǐng)多指教！ 2010-11-22 19:26:51
lstt09nk(金幣+5):感謝回復(fù)，歡迎常來(lái)生物版做客 2010-11-22 16:54:14
mmsong1987(金幣+10):謝謝，以后還請(qǐng)多指教！ 2010-11-22 19:26:51
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你問(wèn)我答： 1.我們滅菌這些瓶子的時(shí)候包六層紗布加報(bào)紙或者只包報(bào)紙，包住瓶蓋就行了。滅菌后在超凈臺(tái)吹干，第二天過(guò)濾培養(yǎng)基加入瓶中。瓶蓋擰松后空氣中的污染是不會(huì)進(jìn)入瓶?jī)?nèi)的，否則怎么敢在培養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候擰松瓶蓋呢？若是培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶，可以4～6個(gè)一組包于報(bào)紙中，烘箱烘干即可。 2.我不明白樓主干嘛準(zhǔn)備兩批瓶子。過(guò)濾前的瓶子不需要無(wú)菌，只要保證過(guò)濾后裝培養(yǎng)基的瓶子無(wú)菌就行。也可以不拿進(jìn)超凈臺(tái)，每次吸到注射器里面，把注射器拿進(jìn)去不就行了？ 3.我們使用的國(guó)產(chǎn)針頭濾器，裝了濾膜后放在鋁制飯盒內(nèi)，用報(bào)紙包好飯盒拿去滅菌的。滅菌后烘干使用。 4.四季青的血清我們是滅活的，水浴56攝氏度30分鐘。 5.－80度可以保存細(xì)胞一陣，但還是推薦液氮。液氮罐可以用Thermo什么的，質(zhì)量一定要好。不然幾十上百升液氮泄露，也很恐怖的。 [ Last edited by Rubisco580 on 2010-11-22 at 16:39 ] |
2樓2010-11-22 16:36:12
mmsong1987
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非常感謝你的回答，學(xué)習(xí)了很多，還是有些細(xì)節(jié)問(wèn)題想確認(rèn)一下 裝濾過(guò)的培養(yǎng)基的試劑瓶瓶口是先用六層紗布包好最外層再用報(bào)紙嗎？從滅菌鍋里取出后直接放到超凈臺(tái)吹干嗎？從滅菌鍋到超凈臺(tái)的途中有什么注意事項(xiàng)呢？瓶蓋一直是擰松狀態(tài)嗎？ 玻璃培養(yǎng)瓶的瓶蓋也是瓶口用6層紗布包好然后4~6個(gè)一組用報(bào)紙之類(lèi)的包下滅菌，滅完了之后直接取出放烘箱中烘干？瓶口的蓋子也是一直旋松狀態(tài)的？烘干之后蓋子該旋緊了吧？ 關(guān)于培養(yǎng)基的過(guò)濾，我們用的是別的老師送的一個(gè)不銹鋼正壓濾器，我每次是直接拿用量筒分裝好的裝培養(yǎng)基的藍(lán)蓋試劑瓶外面噴點(diǎn)酒精然后直接導(dǎo)入濾器中的，然后用一個(gè)加壓球（血壓球，就是跟量血壓用的那個(gè)差不多，流速還行）加壓讓濾液流出的，出口是滅過(guò)的瓶子。不知道你說(shuō)的“也可以不拿進(jìn)超凈臺(tái)，每次吸到注射器里面，直接注射器進(jìn)去”有些不解？培養(yǎng)基一次都配1L，用注射器加針頭濾器不是很慢嗎？ 另外，懷疑染菌的加過(guò)血清的培養(yǎng)基除了扔掉還有別的補(bǔ)救措施沒(méi)？ |
3樓2010-11-22 19:25:41
Rubisco580
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mmsong1987(金幣+10):謝謝 2010-11-23 10:41:10
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六層紗布和報(bào)紙?jiān)谝黄�，大小一樣或者�?bào)紙大一點(diǎn)，然后橡皮筋捆緊。滅菌后取出時(shí)擰緊與否關(guān)系不大，剛拿出來(lái)很燙還是別擰了。在超凈臺(tái)里面吹的時(shí)候也是擰松的。 玻璃培養(yǎng)瓶瓶口無(wú)需包紗布，只要這組瓶子都包在報(bào)紙里面就行。瓶蓋一直是松的，包括養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候，不然細(xì)胞憋死了……當(dāng)然，你觀察細(xì)胞的時(shí)候擰緊，免得灑了。 注射器用在胰酶之類(lèi)的體積不太大的液體滅菌。進(jìn)過(guò)濾器前的東西，不需要刻意噴酒精，因?yàn)槟愕呐囵B(yǎng)基也不是無(wú)菌的嘛。我們也用的正壓濾器，用長(zhǎng)的塑料管將培養(yǎng)基導(dǎo)入濾器。我們的培養(yǎng)基是放在2L燒杯里的，燒杯就放在超凈臺(tái)外面。如果你的導(dǎo)管夠長(zhǎng)，也可以這么做。 懷疑染菌的培養(yǎng)基可以取一點(diǎn)在培養(yǎng)瓶中養(yǎng)，看看會(huì)不會(huì)長(zhǎng)菌。補(bǔ)救措施嘛，加抗生素或許可以，但是不推薦，還是扔掉保險(xiǎn)，萬(wàn)一處理的不夠干凈污染了細(xì)胞就麻煩了。 |
4樓2010-11-23 10:01:14
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