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[交流]
【求助/交流】請教試劑瓶等滅菌的包裝
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本人是學化學的，沒有接受過正規(guī)的細胞培養(yǎng)操作培訓，想請教一些關于細胞培養(yǎng)問題，期生物的同學能給解答疑問，多謝！ 1. 像玻璃培養(yǎng)瓶，藍蓋試劑瓶之類的，高壓滅菌前要怎樣包裝呢？如果只是把瓶口稍微擰松讓蒸汽進去等滅菌結(jié)束后直接把瓶蓋擰緊，那么瓶內(nèi)蒸汽冷凝后形成的水珠怎么辦呢？放在鼓風干燥箱里烘干的話怎么保證箱體內(nèi)的空氣不會導致滅過的瓶子二次污染呢？看到有人說用8層紗布，要整體都包住嗎？這樣的話大的1L的藍蓋瓶豈不是要專門縫個紗布袋了？ 2. 分裝培養(yǎng)基的時候，是在過膜之前先用量筒分裝成200 mL等不同的體積后再過濾嗎？因為濾過之后又要一批瓶子，這樣每次都要準備兩個批量的瓶子，是這樣嗎？另外，把這些分裝好后的瓶子噴過酒精直接拿到超凈臺里進行過濾操作，這樣打開瓶口后，瓶內(nèi)的細菌不就留在超凈臺內(nèi)了嗎？ 3. 那些國產(chǎn)的針頭濾器，據(jù)說可以重復利用，是直接把微孔濾膜裝在濾器后用紗布之類的包好放在滅菌鍋里滅菌，然后就可以直接濾胰酶之類的了嗎？因為是新手，一切還在學習階段，實驗室經(jīng)費也不是很寬裕，不好意思剛開始就拿那種無菌包裝的練習。 4. 四季青的血清要滅活嗎？看網(wǎng)上搜出來的結(jié)果是各式各樣的，我們主要是用來做傳代細胞的培養(yǎng)，大多是腫瘤細胞。 5. 細胞凍存是不是只在-80度冰箱就可以短期保存，比如2~3個月之久。凍存細胞的液氮罐記得都有能放凍存管的格子，跟化學用的不大一樣，應該買什么樣的液氮罐啊，什么廠家產(chǎn)的好呢？ |
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mmsong1987(金幣+10):謝謝 2010-11-23 10:41:10
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六層紗布和報紙在一起，大小一樣或者報紙大一點，然后橡皮筋捆緊。滅菌后取出時擰緊與否關系不大，剛拿出來很燙還是別擰了。在超凈臺里面吹的時候也是擰松的。 玻璃培養(yǎng)瓶瓶口無需包紗布，只要這組瓶子都包在報紙里面就行。瓶蓋一直是松的，包括養(yǎng)細胞的時候，不然細胞憋死了……當然，你觀察細胞的時候擰緊，免得灑了。 注射器用在胰酶之類的體積不太大的液體滅菌。進過濾器前的東西，不需要刻意噴酒精，因為你的培養(yǎng)基也不是無菌的嘛。我們也用的正壓濾器，用長的塑料管將培養(yǎng)基導入濾器。我們的培養(yǎng)基是放在2L燒杯里的，燒杯就放在超凈臺外面。如果你的導管夠長，也可以這么做。 懷疑染菌的培養(yǎng)基可以取一點在培養(yǎng)瓶中養(yǎng)，看看會不會長菌。補救措施嘛，加抗生素或許可以，但是不推薦，還是扔掉保險，萬一處理的不夠干凈污染了細胞就麻煩了。 |
4樓2010-11-23 10:01:14
★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金幣+5):感謝回復，歡迎常來生物版做客 2010-11-22 16:54:14
mmsong1987(金幣+10):謝謝，以后還請多指教！ 2010-11-22 19:26:51
lstt09nk(金幣+5):感謝回復，歡迎常來生物版做客 2010-11-22 16:54:14
mmsong1987(金幣+10):謝謝，以后還請多指教！ 2010-11-22 19:26:51
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你問我答： 1.我們滅菌這些瓶子的時候包六層紗布加報紙或者只包報紙，包住瓶蓋就行了。滅菌后在超凈臺吹干，第二天過濾培養(yǎng)基加入瓶中。瓶蓋擰松后空氣中的污染是不會進入瓶內(nèi)的，否則怎么敢在培養(yǎng)細胞的時候擰松瓶蓋呢？若是培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)瓶，可以4～6個一組包于報紙中，烘箱烘干即可。 2.我不明白樓主干嘛準備兩批瓶子。過濾前的瓶子不需要無菌，只要保證過濾后裝培養(yǎng)基的瓶子無菌就行。也可以不拿進超凈臺，每次吸到注射器里面，把注射器拿進去不就行了？ 3.我們使用的國產(chǎn)針頭濾器，裝了濾膜后放在鋁制飯盒內(nèi)，用報紙包好飯盒拿去滅菌的。滅菌后烘干使用。 4.四季青的血清我們是滅活的，水浴56攝氏度30分鐘。 5.－80度可以保存細胞一陣，但還是推薦液氮。液氮罐可以用Thermo什么的，質(zhì)量一定要好。不然幾十上百升液氮泄露，也很恐怖的。 [ Last edited by Rubisco580 on 2010-11-22 at 16:39 ] |
2樓2010-11-22 16:36:12
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非常感謝你的回答，學習了很多，還是有些細節(jié)問題想確認一下 裝濾過的培養(yǎng)基的試劑瓶瓶口是先用六層紗布包好最外層再用報紙嗎？從滅菌鍋里取出后直接放到超凈臺吹干嗎？從滅菌鍋到超凈臺的途中有什么注意事項呢？瓶蓋一直是擰松狀態(tài)嗎？ 玻璃培養(yǎng)瓶的瓶蓋也是瓶口用6層紗布包好然后4~6個一組用報紙之類的包下滅菌，滅完了之后直接取出放烘箱中烘干？瓶口的蓋子也是一直旋松狀態(tài)的？烘干之后蓋子該旋緊了吧？ 關于培養(yǎng)基的過濾，我們用的是別的老師送的一個不銹鋼正壓濾器，我每次是直接拿用量筒分裝好的裝培養(yǎng)基的藍蓋試劑瓶外面噴點酒精然后直接導入濾器中的，然后用一個加壓球（血壓球，就是跟量血壓用的那個差不多，流速還行）加壓讓濾液流出的，出口是滅過的瓶子。不知道你說的“也可以不拿進超凈臺，每次吸到注射器里面，直接注射器進去”有些不解？培養(yǎng)基一次都配1L，用注射器加針頭濾器不是很慢嗎？ 另外，懷疑染菌的加過血清的培養(yǎng)基除了扔掉還有別的補救措施沒？ |
3樓2010-11-22 19:25:41
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