| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4100 | 回復(fù): 3 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖,點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
mmsong1987金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
[交流]
【求助/交流】請(qǐng)教試劑瓶等滅菌的包裝
|
|||
|
本人是學(xué)化學(xué)的,沒(méi)有接受過(guò)正規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)操作培訓(xùn),想請(qǐng)教一些關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題,期生物的同學(xué)能給解答疑問(wèn),多謝! 1. 像玻璃培養(yǎng)瓶,藍(lán)蓋試劑瓶之類的,高壓滅菌前要怎樣包裝呢?如果只是把瓶口稍微擰松讓蒸汽進(jìn)去等滅菌結(jié)束后直接把瓶蓋擰緊,那么瓶?jī)?nèi)蒸汽冷凝后形成的水珠怎么辦呢?放在鼓風(fēng)干燥箱里烘干的話怎么保證箱體內(nèi)的空氣不會(huì)導(dǎo)致滅過(guò)的瓶子二次污染呢?看到有人說(shuō)用8層紗布,要整體都包住嗎?這樣的話大的1L的藍(lán)蓋瓶豈不是要專門(mén)縫個(gè)紗布袋了? 2. 分裝培養(yǎng)基的時(shí)候,是在過(guò)膜之前先用量筒分裝成200 mL等不同的體積后再過(guò)濾嗎?因?yàn)闉V過(guò)之后又要一批瓶子,這樣每次都要準(zhǔn)備兩個(gè)批量的瓶子,是這樣嗎?另外,把這些分裝好后的瓶子噴過(guò)酒精直接拿到超凈臺(tái)里進(jìn)行過(guò)濾操作,這樣打開(kāi)瓶口后,瓶?jī)?nèi)的細(xì)菌不就留在超凈臺(tái)內(nèi)了嗎? 3. 那些國(guó)產(chǎn)的針頭濾器,據(jù)說(shuō)可以重復(fù)利用,是直接把微孔濾膜裝在濾器后用紗布之類的包好放在滅菌鍋里滅菌,然后就可以直接濾胰酶之類的了嗎?因?yàn)槭切率,一切還在學(xué)習(xí)階段,實(shí)驗(yàn)室經(jīng)費(fèi)也不是很寬裕,不好意思剛開(kāi)始就拿那種無(wú)菌包裝的練習(xí)。 4. 四季青的血清要滅活嗎?看網(wǎng)上搜出來(lái)的結(jié)果是各式各樣的,我們主要是用來(lái)做傳代細(xì)胞的培養(yǎng),大多是腫瘤細(xì)胞。 5. 細(xì)胞凍存是不是只在-80度冰箱就可以短期保存,比如2~3個(gè)月之久。凍存細(xì)胞的液氮罐記得都有能放凍存管的格子,跟化學(xué)用的不大一樣,應(yīng)該買什么樣的液氮罐啊,什么廠家產(chǎn)的好呢? |
細(xì)胞 |
» 搶金幣啦!回帖就可以得到:
+1/195
+2/142
+1/86
+1/85
+1/56
+1/46
+1/41
+1/39
+1/38
+2/26
+1/19
+1/17
+1/16
+1/13
+1/12
+1/10
+1/6
+1/5
+2/2
+1/2
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
非常感謝你的回答,學(xué)習(xí)了很多,還是有些細(xì)節(jié)問(wèn)題想確認(rèn)一下 裝濾過(guò)的培養(yǎng)基的試劑瓶瓶口是先用六層紗布包好最外層再用報(bào)紙嗎?從滅菌鍋里取出后直接放到超凈臺(tái)吹干嗎?從滅菌鍋到超凈臺(tái)的途中有什么注意事項(xiàng)呢?瓶蓋一直是擰松狀態(tài)嗎? 玻璃培養(yǎng)瓶的瓶蓋也是瓶口用6層紗布包好然后4~6個(gè)一組用報(bào)紙之類的包下滅菌,滅完了之后直接取出放烘箱中烘干?瓶口的蓋子也是一直旋松狀態(tài)的?烘干之后蓋子該旋緊了吧? 關(guān)于培養(yǎng)基的過(guò)濾,我們用的是別的老師送的一個(gè)不銹鋼正壓濾器,我每次是直接拿用量筒分裝好的裝培養(yǎng)基的藍(lán)蓋試劑瓶外面噴點(diǎn)酒精然后直接導(dǎo)入濾器中的,然后用一個(gè)加壓球(血壓球,就是跟量血壓用的那個(gè)差不多,流速還行)加壓讓濾液流出的,出口是滅過(guò)的瓶子。不知道你說(shuō)的“也可以不拿進(jìn)超凈臺(tái),每次吸到注射器里面,直接注射器進(jìn)去”有些不解?培養(yǎng)基一次都配1L,用注射器加針頭濾器不是很慢嗎? 另外,懷疑染菌的加過(guò)血清的培養(yǎng)基除了扔掉還有別的補(bǔ)救措施沒(méi)? |
金蟲(chóng) (小有名氣)
|
你問(wèn)我答: 1.我們滅菌這些瓶子的時(shí)候包六層紗布加報(bào)紙或者只包報(bào)紙,包住瓶蓋就行了。滅菌后在超凈臺(tái)吹干,第二天過(guò)濾培養(yǎng)基加入瓶中。瓶蓋擰松后空氣中的污染是不會(huì)進(jìn)入瓶?jī)?nèi)的,否則怎么敢在培養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候擰松瓶蓋呢?若是培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶,可以4~6個(gè)一組包于報(bào)紙中,烘箱烘干即可。 2.我不明白樓主干嘛準(zhǔn)備兩批瓶子。過(guò)濾前的瓶子不需要無(wú)菌,只要保證過(guò)濾后裝培養(yǎng)基的瓶子無(wú)菌就行。也可以不拿進(jìn)超凈臺(tái),每次吸到注射器里面,把注射器拿進(jìn)去不就行了? 3.我們使用的國(guó)產(chǎn)針頭濾器,裝了濾膜后放在鋁制飯盒內(nèi),用報(bào)紙包好飯盒拿去滅菌的。滅菌后烘干使用。 4.四季青的血清我們是滅活的,水浴56攝氏度30分鐘。 5.-80度可以保存細(xì)胞一陣,但還是推薦液氮。液氮罐可以用Thermo什么的,質(zhì)量一定要好。不然幾十上百升液氮泄露,也很恐怖的。 [ Last edited by Rubisco580 on 2010-11-22 at 16:39 ] |
金蟲(chóng) (小有名氣)
|
六層紗布和報(bào)紙?jiān)谝黄穑笮∫粯踊蛘邎?bào)紙大一點(diǎn),然后橡皮筋捆緊。滅菌后取出時(shí)擰緊與否關(guān)系不大,剛拿出來(lái)很燙還是別擰了。在超凈臺(tái)里面吹的時(shí)候也是擰松的。 玻璃培養(yǎng)瓶瓶口無(wú)需包紗布,只要這組瓶子都包在報(bào)紙里面就行。瓶蓋一直是松的,包括養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候,不然細(xì)胞憋死了……當(dāng)然,你觀察細(xì)胞的時(shí)候擰緊,免得灑了。 注射器用在胰酶之類的體積不太大的液體滅菌。進(jìn)過(guò)濾器前的東西,不需要刻意噴酒精,因?yàn)槟愕呐囵B(yǎng)基也不是無(wú)菌的嘛。我們也用的正壓濾器,用長(zhǎng)的塑料管將培養(yǎng)基導(dǎo)入濾器。我們的培養(yǎng)基是放在2L燒杯里的,燒杯就放在超凈臺(tái)外面。如果你的導(dǎo)管夠長(zhǎng),也可以這么做。 懷疑染菌的培養(yǎng)基可以取一點(diǎn)在培養(yǎng)瓶中養(yǎng),看看會(huì)不會(huì)長(zhǎng)菌。補(bǔ)救措施嘛,加抗生素或許可以,但是不推薦,還是扔掉保險(xiǎn),萬(wàn)一處理的不夠干凈污染了細(xì)胞就麻煩了。 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 抱歉 +4 | 田洪有 2026-03-30 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +6 | AZMK 2026-03-29 | 9/450 |
|
|
[考研] 0703一志愿9,初試成績(jī):338,四六級(jí)已過(guò),有科研經(jīng)歷,求調(diào)劑! +7 | Zuhui0306 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
[考研] 材料專碩 085600求調(diào)劑 +7 | BBQ233 2026-03-30 | 7/350 |
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +8 | HanBeiNingZC 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
[考研] 070300化學(xué)354求調(diào)劑 +7 | 101次希望 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
[考研] 化學(xué)308分調(diào)劑 +7 | 你好明天你好 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
[考研] 070300一志愿211,312分求調(diào)劑院校 +4 | 小黃鴨寶 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
[考研] 337求調(diào)劑 +6 | 《樹(shù)》 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
[考研] 318一志愿吉林大學(xué)生物與醫(yī)藥 求調(diào)劑 +5 | 篤行致遠(yuǎn). 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
[考研] 343求調(diào)劑085601 +3 | 要努力學(xué)習(xí)x 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +5 | 愛(ài)羈絆 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
[考研] 081200-314 +3 | LILIQQ 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +4 | 丟掉懶惰 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
[考研] 265求調(diào)劑11408 +3 | 劉小鹿lu 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +5 | Pigcasso 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 李嘉圖·S·路 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
[考研] 0703化學(xué)338求調(diào)劑! +6 | Zuhui0306 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
[考研] 機(jī)械學(xué)碩總分317求調(diào)劑。。! +4 | Acaciad 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料與化工303分求調(diào)劑 +4 | 為學(xué)666 2026-03-24 | 4/200 |
|