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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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zhangxn2010

木蟲 (著名寫手)

[交流] 【求助/交流】連接幾次，仍然不見菌落出現(xiàn)

最近做載體構(gòu)建，很不順。
主要是把酶切后的片段（約2000bp)連到載體上，轉(zhuǎn)化后總是沒有菌落出現(xiàn)。
前些天相同的位置連了另一條片段出現(xiàn)了很多克隆，測序也是對的，現(xiàn)在真是很迷茫（感態(tài)應(yīng)該沒問題，因?yàn)橛玫耐慌�；T4Ligase應(yīng)該也沒問題）

[ Last edited by zhangxn2010 on 2010-12-4 at 09:37 ]

PS:本帖中問題已在2011年解決，當(dāng)時沒有放上具體原因，現(xiàn)做說明，以對有相關(guān)問題的蟲友有啟發(fā)。
用相當(dāng)長的時間排除，最后在電泳液上找出了問題，第一個載體構(gòu)建完之前一直選用TAE做緩沖液，后來一個剛來的海歸博士建議用TBE（理由當(dāng)然是條帶清楚之類的），噩夢就開始了，原來是TBE和膠回收試劑盒有沖突，造成回收產(chǎn)物不能進(jìn)行連接。
希望蟲子們多注意小細(xì)節(jié)，我因?yàn)檫@點(diǎn)失誤耽誤近兩月，領(lǐng)導(dǎo)眼都快綠了（當(dāng)然還有其他并行工作，否則直接被炒掉了）。

[ Last edited by zhangxn2010 on 2012-12-11 at 15:10 ]

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