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maxwell1988金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于PCR產(chǎn)物的突變 已有4人參與
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我是個(gè)剛進(jìn)入分子克隆實(shí)驗(yàn)的菜鳥(niǎo)。前段時(shí)間剛從外周血細(xì)胞中提取了其總RNA，再進(jìn)行RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。以該cDNA作為模板，進(jìn)行常規(guī)的PCR。之后就是簡(jiǎn)單的割膠回收，TA克隆。 送去測(cè)序后，連續(xù)幾次得到的結(jié)果都是在目的基因序列的3'端大概9個(gè)堿基處，多了一個(gè)同樣的一個(gè)堿基。 如果是突變，那么為什么會(huì)在同樣的地方出現(xiàn)同樣的情況？如果是模板的問(wèn)題，為什么以該模板做的其他PCR產(chǎn)物拿去測(cè)序卻完全正確？會(huì)不會(huì)是TA克隆出了什么問(wèn)題？請(qǐng)高手們多多指教！  |
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ben1147
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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3樓2010-12-06 12:22:20
won7
金蟲(chóng) (小有名氣)
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
silicare(金幣+1):謝謝參與 2010-12-06 12:13:01
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
silicare(金幣+1):謝謝參與 2010-12-06 12:13:01
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不太明白，你怎么確定哪個(gè)位置是一個(gè)突變，而不是真實(shí)的堿基呢？盡管PCR因?yàn)槊傅膯?wèn)題會(huì)有錯(cuò)配，但幾次PCR、測(cè)序都是相同的話，應(yīng)該可以確定是真實(shí)堿基了，但是如果你是用同樣的克隆，測(cè)序幾次，都相同就沒(méi)有什么問(wèn)題，說(shuō)明測(cè)序沒(méi)有問(wèn)題。 [ Last edited by won7 on 2010-12-6 at 11:17 ] |
2樓2010-12-06 11:15:47
rainwander
鐵桿木蟲(chóng) (知名作家)
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4樓2010-12-06 13:49:28
maxwell1988
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5樓2010-12-06 15:25:18
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