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seanloveu木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助】請教,DPPH 已有4人參與
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請教一般做DPPH清除自由基,對照的VC需要幾個(gè)梯度濃度,每個(gè)濃度具體是多少?謝謝 [ Last edited by lovibond on 2011-10-2 at 18:30 ] |
榮譽(yù)版主 (知名作家)
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稱取DPPH粉末0.0079g,用無水乙醇溶解DPPH粉末,并定容至100 mL,配制成最終濃度為20 µmol/L的DPPH乙醇溶液,放置于棕色瓶中,并保存在暗處備用。將樣品稀釋適當(dāng)倍數(shù),使樣品進(jìn)行分析時(shí)其吸光值最好在0.7以下為準(zhǔn)。首先,取1 mL DPPH乙醇溶液與2 mL已稀釋適當(dāng)倍數(shù)的樣品溶液在具塞試管中混合,混合后及時(shí)放置暗處,室溫進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)進(jìn)行30 min后,取混合液倒入玻璃比色皿中,測定其在517nm處的吸光值,同時(shí)利用無水乙醇進(jìn)行空白試驗(yàn),平行試驗(yàn)三次。為了方便考察樣品對DPPH自由基清除的能力,使用Trolox作為標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行對照,制作Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品的Trolox當(dāng)量。 采用系列Trolox溶液(0 µmol/L、4 µmol/L、8 µmol/L、12 µmol/L、16 µmol/L和20 µmol/L)代替樣品溶液,采用與樣品溶液相同步驟,分別測定不同濃度的Trolox反應(yīng)后在測定后517nm處的吸光值,根據(jù)其濃度與所得的吸光值的關(guān)系繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,用于計(jì)算樣品的半抑制率IC50即自由基清除率為50%時(shí)所需的樣品濃度。DPPH自由基清除率的計(jì)算公式如下: 式中,A517空白為空白樣在517 nm處的吸光值,A517樣品為待測樣在517 nm處的吸光值。 |

木蟲 (正式寫手)
木蟲 (正式寫手)
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