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wuw579

鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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[交流] 【求助/交流】PCR問(wèn)題

我欲設(shè)計(jì)兩種PCR：模板引物試劑程序都完全一樣
1、40個(gè)循環(huán)
2、先20個(gè)循環(huán)，取出1微升為模板再20個(gè)循環(huán)
誰(shuí)能告訴我產(chǎn)物量有什么區(qū)別

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1樓 2011-02-17 15:42:17

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bilangyiqi

鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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2樓2011-02-17 16:04:42

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三磷酸腺苷

鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

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amisking(金幣+1): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流。 2011-02-17 20:01:09
wuw579(金幣+2): 是有點(diǎn)問(wèn)題呵呵謝謝啦 2011-02-17 22:01:06

這種多變量動(dòng)力學(xué)模型的問(wèn)題，我想論壇上沒(méi)有人能回答……專(zhuān)門(mén)弄數(shù)學(xué)模型的活性知道……

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3樓2011-02-17 16:04:45

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冼亮淀粉酶

專(zhuān)家顧問(wèn) (知名作家)

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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3): 熱心的淀粉酶 2011-02-21 22:13:49

產(chǎn)物量有無(wú)變化都有可能，因?yàn)橛行┮蛩囟家呀?jīng)改變了。40個(gè)連續(xù)循環(huán)能得到的產(chǎn)物，改為兩段PCR后減少甚至完全得不到，又或者會(huì)變得更多。

1、因?yàn)樵?0個(gè)PCR后還有個(gè)總延伸階段，如果聚合酶活力下降效率降低，或者聚合堿基的速度降低，那么聚合成的單鏈將會(huì)在3撇端截短，此階段可以以?xún)蓷l單鏈各為模板將各自3撇端補(bǔ)全，消除部分單鏈而成完整雙鏈。如果20個(gè)循環(huán)后取出產(chǎn)物作為模板，那么就要用第一個(gè)循環(huán)來(lái)補(bǔ)全模板，少了一個(gè)有效的循環(huán)，導(dǎo)致最終產(chǎn)物減少二分之一。

2、分段PCR補(bǔ)充了聚合酶和dNTP，使得產(chǎn)物變多，不過(guò)一般來(lái)說(shuō)dNTP都會(huì)夠的，一般不會(huì)少，主要可能是聚合酶鈍化，可能需要補(bǔ)充。

3、模板的量變化，這會(huì)導(dǎo)致不確定性。明明是摸索好的東西，改變了就難說(shuō)了，可能更合適或者更不合適，所以導(dǎo)致產(chǎn)物變多還是變少都難說(shuō)。

所以說(shuō)難說(shuō)啊，你就試一次吧，實(shí)驗(yàn)就是要摸索的，誰(shuí)都知道的結(jié)果就不好玩了。

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4樓2011-02-21 21:37:05

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烏和尚

木蟲(chóng) (小有名氣)

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★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

引用回帖:

998653樓: Originally posted by bilangyiqi at 2011-02-17 16:04:42
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5樓2012-07-25 19:24:47

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