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475502411

銅蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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[交流] 【求助/交流】我的PCR引物很好，但加酶切位點(diǎn)后擴(kuò)不出來(lái)，不知道什么原因？

我的PCR引物很好，但加酶切位點(diǎn)后擴(kuò)不出來(lái)，不知道什么原因？請(qǐng)高手指點(diǎn)�。�！謝謝

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1樓 2011-03-10 23:04:08

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anjinghebust

至尊木蟲(chóng) (知名作家)

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祝福難題早日解決！

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4樓2011-03-10 23:42:38

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brightfuture01

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最?lèi)?ài)花詩(shī)雨(金幣+2): 鼓勵(lì)交流~ 2011-03-11 09:47:05

引用回帖:

Originally posted by 475502411 at 2011-03-10 23:04:08:
我的PCR引物很好，但加酶切位點(diǎn)后擴(kuò)不出來(lái)，不知道什么原因？請(qǐng)高手指點(diǎn)�。�！謝謝

看看你加酶切位點(diǎn)之后有沒(méi)有和3‘端配對(duì)兒，形成發(fā)卡？

PCR之后有沒(méi)有引物二聚體？

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2樓2011-03-10 23:11:10

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phoenix211

金蟲(chóng) (小有名氣)

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可以?xún)?yōu)化下擴(kuò)增的條件。
做個(gè)溫度梯度。
調(diào)整下體系什么的。
加點(diǎn)BSA或DMSO什么的有時(shí)候會(huì)有效果。

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5樓2011-03-11 01:33:10

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gongeleven

鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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加了酶切位點(diǎn)后就不是你那個(gè) 很好的引物了。。。

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7樓2011-03-11 09:01:55

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