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tangchaoxi

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[交流] 【求助/交流】酶連轉(zhuǎn)化

我將載體和片段分別用同樣的兩個(gè)酶雙酶切后酶連，轉(zhuǎn)化子提質(zhì)粒酶切驗(yàn)證，結(jié)果只有一個(gè)條帶，大概載體那么大，懷疑是不是載體自連了？如果是的話，我如何避免載體自連，把我的目的片段連上去呢？請(qǐng)各位幫幫忙…

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1樓 2011-03-24 11:13:38

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tangchaoxi

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Originally posted by whyann at 2011-03-24 13:13:53:
既然是雙酶切，產(chǎn)生的應(yīng)該是不同的粘性末端，怎么會(huì)自連，應(yīng)該是其他問(wèn)題，樓主好好回憶每步

謝謝！如果不是自連，那肯定是連上目的片段了，因?yàn)檩d體有抗性啊，沒(méi)連上的話是不會(huì)轉(zhuǎn)化出來(lái)的對(duì)嗎？

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7樓2011-03-24 15:31:51

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gongeleven

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tangchaoxi(金幣+1): 2011-03-24 15:32:38

載體酶切后加CIP處理

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2樓2011-03-24 11:59:39

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wqj1988926

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對(duì)連接產(chǎn)物篩選，一般不是都有一些抗性基因連接后表達(dá)之類的，

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3樓2011-03-24 12:55:58

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tangchaoxi(金幣+2): 2011-03-24 15:30:25

既然是雙酶切，產(chǎn)生的應(yīng)該是不同的粘性末端，怎么會(huì)自連，應(yīng)該是其他問(wèn)題，樓主好好回憶每步

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4樓2011-03-24 13:13:53

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