 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 酶連之后如何檢測？
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2391 | 回復: 7 | |||
starfishfly銅蟲 (初入文壇)
|
[求助]
酶連之后如何檢測？
|
|
電泳檢測的話，圖譜應該是什么樣子的？ 因為酶連之后做轉(zhuǎn)化一直長不出來，所以在電轉(zhuǎn)之前把酶連產(chǎn)物跑了電泳，電泳圖譜類似于酶切之后的圖譜。不是應該是連在載體上了嗎？這個時候的質(zhì)粒載體是什么狀態(tài)呢？超螺旋，還是松弛閉環(huán)？ 我電轉(zhuǎn)時也電了 質(zhì)粒載體，當時切完載體并沒有割膠回收，而是直接用來酶連了，這樣也不會一點都不長吧？我電的質(zhì)粒載體也沒有長。。。。 求解答�。�！~~��！  |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有82人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 辣根過氧化物酶（HRP）酶活檢測方法
已經(jīng)有82人回復
- 微量樣品酶催化時用什么裝置？氬氣保護情況下怎么進行產(chǎn)物的檢測？
已經(jīng)有3人回復
- 酶基因的過表達怎么檢測呢
已經(jīng)有8人回復
- 如何檢測酶的活性？
已經(jīng)有6人回復
- 堿性磷酸酶的檢測
已經(jīng)有17人回復
- 求助酶標記檢測新方法
已經(jīng)有6人回復
- 做電化學酶生物傳感器檢測農(nóng)殘的請進！討論其應用及前景
已經(jīng)有5人回復
- PCR產(chǎn)物酶切檢測不到東西是為什么
已經(jīng)有11人回復
- 【求助/交流】質(zhì)粒DNA可以不通過酶切直接跑電泳檢測嗎？
已經(jīng)有24人回復
- 一句關于有機磷酶聯(lián)免疫吸附檢測的翻譯
已經(jīng)有2人回復
- 【求助/交流】脂肪酶活性檢測
已經(jīng)有17人回復
- 如何設計實驗檢測蛋白酶的分泌途徑
已經(jīng)有2人回復
roomofxw
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 5
- 應助: 13 (小學生)
- 貴賓: 0.005
- 金幣: 2882.1
- 散金: 69
- 紅花: 7
- 帖子: 755
- 在線: 1020小時
- 蟲號: 812203
- 注冊: 2009-07-20
- 專業(yè): 生物化學
2樓2011-04-18 17:17:09
starfishfly
銅蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 55.8
- 帖子: 29
- 在線: 12小時
- 蟲號: 1239225
- 注冊: 2011-03-20
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學
3樓2011-04-18 17:25:17
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+5): good 2011-04-18 18:45:00
starfishfly(金幣+1): 酶切產(chǎn)物沒有做割膠回收，但是有重沉，這樣的話也是不受離子的影響的吧。第一次轉(zhuǎn)化是轉(zhuǎn)化出來的，這次不知道怎么就是長不了了。條件是一樣的，只是用的限制性內(nèi)切酶不同。 2011-04-21 10:19:07
dhd997(金幣+5): good 2011-04-18 18:45:00
starfishfly(金幣+1): 酶切產(chǎn)物沒有做割膠回收，但是有重沉，這樣的話也是不受離子的影響的吧。第一次轉(zhuǎn)化是轉(zhuǎn)化出來的，這次不知道怎么就是長不了了。條件是一樣的，只是用的限制性內(nèi)切酶不同。 2011-04-21 10:19:07
| 如果你的連接效率還可以的話，連接液跑電泳，應該是三條帶，一個載體，一個目的片段，還有一個連接產(chǎn)物，前兩個是線性的，后面那個應該是環(huán)狀的，至于是不是超螺旋就不知道了。你說酶切產(chǎn)物沒有回收直接連接，你用的是fermentas的通用buffer？如果不是的話，一定要回收。還有，你電轉(zhuǎn)質(zhì)粒都沒有出轉(zhuǎn)化子，就是轉(zhuǎn)化條件沒有摸好。先用質(zhì)粒摸索個最佳條件，因為連接效率再高也不如質(zhì)粒的濃度高，對吧？ |
4樓2011-04-18 17:38:01
roomofxw
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 5
- 應助: 13 (小學生)
- 貴賓: 0.005
- 金幣: 2882.1
- 散金: 69
- 紅花: 7
- 帖子: 755
- 在線: 1020小時
- 蟲號: 812203
- 注冊: 2009-07-20
- 專業(yè): 生物化學
【答案】應助回帖
starfishfly(金幣+4): 謝謝你~~~我連了之后沒有長 可能是電轉(zhuǎn)的時候某步有問題吧~~~ 2011-04-21 10:14:17
|
沒做過，也見過直接跑電泳檢測連接產(chǎn)物的…… 原因很簡單，轉(zhuǎn)化靈敏度比跑電泳高 理論上，只要連上幾個，平板上就會長，而電泳可不是隨便幾個就能看見的。 電泳能看見怎么也得1ng吧，算5000bp質(zhì)粒，也要0.0006pmol 1mol=6.02*10^24 再算轉(zhuǎn)化率 千分之一 差不多也得十萬個菌落，實際上沒有那么多 隨感一寫，漏斗百出，姑且一聽，歡迎指正 真有方法，萬望指教 |
5樓2011-04-18 17:53:19
空谷幽風
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 32
- 應助: 13 (小學生)
- 貴賓: 0.05
- 金幣: 1106.1
- 散金: 500
- 紅花: 13
- 帖子: 615
- 在線: 116.5小時
- 蟲號: 714271
- 注冊: 2009-03-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
6樓2011-04-18 18:07:05
天使托
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
-
專家經(jīng)驗: +57 - MolEPI: 106
- 應助: 95 (初中生)
- 貴賓: 0.263
- 金幣: 16332.8
- 散金: 593
- 紅花: 74
- 沙發(fā): 9
- 帖子: 3652
- 在線: 289小時
- 蟲號: 441757
- 注冊: 2007-10-27
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
- 管轄: 微生物
7樓2011-04-18 18:12:19
8樓2013-03-14 14:05:59
相關版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 starfishfly 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 281求調(diào)劑（0805） +3 | 煙汐憶海 2026-03-16 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +6 | yy要上岸呀 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +7 | 邱gl 2026-03-11 | 8/400 |
|
|
[考研] 藥學383 求調(diào)劑 +3 | 藥學chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +6 | 大可digkids 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 0703方向310分求調(diào)劑 +3 | 努力奮斗112 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中師范071000，325求調(diào)劑 +6 | RuitingC 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料工程327求調(diào)劑 +3 | xiaohe12w 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 中科大材料專碩319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 331求調(diào)劑（0703有機化學 +5 | ZY-05 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑一志愿 985 總分 295 +8 | dream…… 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] ［0860］321分求調(diào)劑，ab區(qū)皆可 +4 | 寶貴熱 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工301求調(diào)劑 +5 | 奕束光 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程調(diào)劑 +4 | 咪咪空空 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 芬達46 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +5 | 超級伊昂大王 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿211化學學碩310分求調(diào)劑 +8 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +3 | 小匕仔汁 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[論文投稿]
投稿問題
 5+4
|
星光燦爛xt 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856化學工程280分求調(diào)劑 +4 | shenzxsn 2026-03-11 | 4/200 |
|