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starfishfly銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
酶連之后如何檢測?
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電泳檢測的話,圖譜應該是什么樣子的? 因為酶連之后做轉化一直長不出來,所以在電轉之前把酶連產(chǎn)物跑了電泳,電泳圖譜類似于酶切之后的圖譜。不是應該是連在載體上了嗎?這個時候的質粒載體是什么狀態(tài)呢?超螺旋,還是松弛閉環(huán)? 我電轉時也電了 質粒載體,當時切完載體并沒有割膠回收,而是直接用來酶連了,這樣也不會一點都不長吧?我電的質粒載體也沒有長。。。。 求解答。。~。 |
| 如果你的連接效率還可以的話,連接液跑電泳,應該是三條帶,一個載體,一個目的片段,還有一個連接產(chǎn)物,前兩個是線性的,后面那個應該是環(huán)狀的,至于是不是超螺旋就不知道了。你說酶切產(chǎn)物沒有回收直接連接,你用的是fermentas的通用buffer?如果不是的話,一定要回收。還有,你電轉質粒都沒有出轉化子,就是轉化條件沒有摸好。先用質粒摸索個最佳條件,因為連接效率再高也不如質粒的濃度高,對吧? |
木蟲 (正式寫手)
銅蟲 (初入文壇)
木蟲 (正式寫手)
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