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jeck.li金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】啟動(dòng)子給怎么弄---大腸桿菌做表達(dá)宿主 已有2人參與
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各位大蝦好！ 我要表達(dá)一個(gè)33kb的片段，需要在前面加一個(gè)T7啟動(dòng)子（通過同源重組--RED重組），為了驗(yàn)證啟動(dòng)子是否加上，需要在啟動(dòng)子附近加個(gè)抗性標(biāo)記。實(shí)在不知道給怎么辦？ 應(yīng)該是以下哪個(gè)順序： 啟動(dòng)子--抗性基因--啟動(dòng)子--目的基因？ 啟動(dòng)子--抗性基因--目的基因？ 謝謝  |
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zhaohq1209
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amisking(金幣+3): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流。 2011-03-30 19:41:49
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amisking(金幣+3): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流。 2011-03-30 19:41:49
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看lz的意思是要在33kb基因的前面加T7啟動(dòng)子。 同時(shí)加入抗性標(biāo)記的目的應(yīng)該不是驗(yàn)證啟動(dòng)子是否加上，而是作為報(bào)告基因進(jìn)行篩 選。 個(gè)人認(rèn)為順序可以是抗性基因-啟動(dòng)子-目的基因。理由如下： 1、啟動(dòng)子肯定在目的基因之前； 2、理論上抗性基因與啟動(dòng)子的位置可以隨意，但二者應(yīng)該相鄰，否則失去篩選的意義。若抗性基因在啟動(dòng)子之后有可能會(huì)影響啟動(dòng)子之后目的基因的表達(dá)，比如發(fā)生移碼突變等。 3、抗性基因在啟動(dòng)子之前可能會(huì)導(dǎo)致表達(dá)量低，但不用擔(dān)心無(wú)法篩選。我曾經(jīng)在基因注釋的非編碼區(qū)插入一個(gè)kan抗性基因，能篩選出來(lái)。 另外，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，插入的抗性基因一般為kan或cm。 祝lz好運(yùn)。 |
2樓2011-03-30 13:24:46
ls2046
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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3樓2011-03-30 16:33:18
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