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jeck.li金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】啟動子給怎么弄---大腸桿菌做表達(dá)宿主 已有2人參與
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各位大蝦好！ 我要表達(dá)一個33kb的片段，需要在前面加一個T7啟動子（通過同源重組--RED重組），為了驗證啟動子是否加上，需要在啟動子附近加個抗性標(biāo)記。實(shí)在不知道給怎么辦？ 應(yīng)該是以下哪個順序： 啟動子--抗性基因--啟動子--目的基因？ 啟動子--抗性基因--目的基因？ 謝謝  |
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ls2046
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3樓2011-03-30 16:33:18
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+3): 鼓勵發(fā)帖交流。 2011-03-30 19:41:49
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amisking(金幣+3): 鼓勵發(fā)帖交流。 2011-03-30 19:41:49
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看lz的意思是要在33kb基因的前面加T7啟動子。 同時加入抗性標(biāo)記的目的應(yīng)該不是驗證啟動子是否加上，而是作為報告基因進(jìn)行篩 選。 個人認(rèn)為順序可以是抗性基因-啟動子-目的基因。理由如下： 1、啟動子肯定在目的基因之前； 2、理論上抗性基因與啟動子的位置可以隨意，但二者應(yīng)該相鄰，否則失去篩選的意義。若抗性基因在啟動子之后有可能會影響啟動子之后目的基因的表達(dá)，比如發(fā)生移碼突變等。 3、抗性基因在啟動子之前可能會導(dǎo)致表達(dá)量低，但不用擔(dān)心無法篩選。我曾經(jīng)在基因注釋的非編碼區(qū)插入一個kan抗性基因，能篩選出來。 另外，據(jù)文獻(xiàn)報道，插入的抗性基因一般為kan或cm。 祝lz好運(yùn)。 |
2樓2011-03-30 13:24:46
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