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liuan6126鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】酵母PRS整合表達(dá)質(zhì)粒使用的問(wèn)題，我需要你的幫助，謝謝 已有4人參與
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我想在營(yíng)養(yǎng)缺陷型酵母CEN.PK2-1C(MATa; ura3-52; trp1-289; leu2-3,112; his3Δ 1; MAL2-8C; SUC2)中整合表達(dá)幾個(gè)基因，手頭有pRS303，pRS304,pRS305，pRS306等質(zhì)粒。 我現(xiàn)在存在一個(gè)很大的疑惑，即：我能不能先用其中一個(gè)質(zhì)粒（假設(shè)為pRS303）表達(dá)一個(gè)基因，構(gòu)建一株菌，命名A吧。我是不是可以繼續(xù)使用另外三個(gè)質(zhì)粒，繼續(xù)整合表達(dá)新的基因到A中，這樣最后，我可以在一株菌內(nèi)，整合表達(dá)四個(gè)基因了。 這個(gè)問(wèn)題的疑惑之處在于，我不是很確定，在后一個(gè)基因表達(dá)后，會(huì)不會(huì)破壞前面整合上去的基因呢？ 謝謝大家，這個(gè)問(wèn)題對(duì)我很重要，請(qǐng)不吝賜教。 |
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liuan6126
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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3樓2011-06-02 14:51:50
susizheng
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
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剛剛查了下你系統(tǒng)的信息，pRS303，pRS304,pRS305，pRS306的篩選標(biāo)記分別是His，TRP，LEU，URA，分別與宿主的營(yíng)養(yǎng)缺陷型互補(bǔ)，所以篩選標(biāo)記方面不存在什么問(wèn)題，可以實(shí)現(xiàn)你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br />
另外不知道你整合位點(diǎn)是怎么選擇的， 如果擔(dān)心后一個(gè)基因整合會(huì)影響前一個(gè)基因，你可以全部選在篩選標(biāo)記處將載體線性化，那么整合整合分別選擇His，TRP，LEU，URA，這樣的話就不沖突了。 |
2樓2011-04-12 16:49:37
4樓2012-02-14 09:38:50
liuan6126
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西瓜(金幣+2): 不遲哈~鼓勵(lì)熱心的朋友！ 2012-02-15 22:20:18
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實(shí)在對(duì)不起，我很久沒(méi)來(lái)了，剛看到，趕緊第一時(shí)間回復(fù)你，我不知道能不能上傳附件，文章名字是‘A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for efficient manipulation of DNA in Saccharomyces cerevisiae’。以后遇到類(lèi)似的質(zhì)粒不明確的事情，可以直接到NCBI上找這個(gè)質(zhì)粒的原始文獻(xiàn)（注意Title和Journal） LOCUS PRS304 4267 bp DNA circular SYN 14-SEP-1995 DEFINITION Yeast integrative vector pRS304 with TRP1 marker, complete sequence. ACCESSION U03436 VERSION U03436.1 GI:416305 KEYWORDS . SOURCE Cloning vector pRS304 ORGANISM Cloning vector pRS304 other sequences; artificial sequences; vectors. REFERENCE 1 (bases 1 to 4267) AUTHORS Sikorski,R.S. and Hieter,P. TITLE A system of shuttle vectors and yeast host strains designed for efficient manipulation of DNA in Saccharomyces cerevisiae JOURNAL Genetics 122 (1), 19-27 (1989) 實(shí)在抱歉，回復(fù)遲了，希望能對(duì)你用，祝進(jìn)步 |
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z-w-p5樓2012-02-15 18:56:14
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