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[交流] 【求助】小麥籽粒中蔗糖-淀粉轉(zhuǎn)化過程中關(guān)鍵酶活性測定

請問有沒有哪位做過小麥籽粒中蔗糖-淀粉轉(zhuǎn)化過程中關(guān)鍵酶（SS、SPS、ADPG-PPase、UDPG-PPase、SSS、GBSS）活性的測定。求方法。

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1樓 2011-04-06 22:38:40

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yangru.520(金幣+2): 2011-04-13 10:18:05

其實(shí)自己就可以測，如果實(shí)在不行，你到中科院水保所找下我同學(xué)，他一直測那個(gè)。459332433QQ

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8樓2011-04-13 02:11:28

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laoganbu33

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大田實(shí)驗(yàn)在開花期掛牌標(biāo)記生長一致且同日開花的麥穗，花后每隔5天取樣，每次15穗，取其劍葉和籽粒，經(jīng)液氮速凍后，置于-40℃冰箱保存，用于腺苷二磷酸葡糖糖焦磷酸化酶（AGPP）、可溶性淀粉合成酶（SSS）、束縛態(tài)淀粉合成酶（GBSS）的測定。另取15穗，分離籽粒置于烘箱中105℃殺青30min，然后80℃烘干稱重，籽粒經(jīng)微型高速萬能粉碎機(jī)粉碎后，用于蔗糖、可溶性總糖、淀粉及其組分含量的測定。
蔗糖含量的測定采用間苯二酚法，可溶性總糖含量的測定采用蒽酮比色法。
取20個(gè)籽粒，加4ml提取液（含100mmol/L Tricine—NaOH（PH=7.5），8mmol/LMgCl2，2mmol/LEDTA，12.5%（V/V）甘油，1%（W/V）PVP—40，50mmol/L2—巰基乙醇），磨成勻漿，在10000×g離心30min，然后收集上清液置于冰浴，作為粗酶液備用。沉淀用1ml提取液洗滌兩次，然后懸浮于2ml的提取介質(zhì)中，用與GBSS活性測定。
AGPP活性測定：取20µl酶粗提取加入110µl反應(yīng)液中（反應(yīng)液最終濃度是100mmol/LHEPES—NaOH（PH=7.4）、1.2mmol/LADPG，3mmol/LPPi，5mmol/L MgCl2，4mmol/LDTT），30℃反應(yīng)20min后，沸水中終止反應(yīng)30s，10000×g，10min，取上清液100µl加5.2µl比色液（5.76mmol/LNADP，0.08unitP—glucomutase（磷酸葡萄糖變位酶），0.07unitG6P—脫氫酶）。30℃反應(yīng)10min后，測定340nmOD值。根據(jù)OD值的增加量計(jì)算ADPG焦磷酸化酶的活力，單位為nmol/1000seeds min，以20µl煮沸的粗酶液作為對(duì)照。
SSS、GBSS活性的測定：取20µl酶粗提取液加入36µl反應(yīng)液Ⅰ（反應(yīng)液最終濃度為50mmol/LHEPES—NaOH（PH=7.4）、1.6mmol/LADPG、0.7mg支鏈淀粉、15mmol/LDTT），30℃反應(yīng)20min后，沸水中終止反應(yīng)30s，冰浴中冷卻；加20µl反應(yīng)液Ⅱ（含50mmol/LHEPES—NaOH（PH=7.4）、4mmol/LPEP、200mmol/LKCl、10mmol/LMgCl2、1.2unit丙酮酸激酶），30℃反應(yīng)20min后，沸水中終止反應(yīng)30s，10000×g離心10min。取上清液60µl與43µl反應(yīng)液Ⅲ（50mmol/LHEPES—NaOH（PH=7.4）、10mmol/L葡萄糖、20mM MgCl2、2mmol/LNADP、1.4unit己糖激酶、0.35unit G6P—脫氫酶），30℃反應(yīng)10min后，測定340nmOD值的變化，單位為nmol/1000seeds min，以20µl煮沸的粗酶液作為對(duì)照。

希望對(duì)你有所幫助，呵呵

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11樓2011-12-04 16:22:09

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青島一逍遙

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yangru.520(金幣+2): 2011-04-07 15:56:52

這些指標(biāo)很費(fèi)錢的說

我這有部分方法~~

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2樓2011-04-07 14:47:57

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tjshan1983

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yangru.520(金幣+2): 2011-04-07 16:37:13

SS、SPS可參考中國科學(xué)院上海植物生理研究所, 上海市植物生理學(xué)會(huì). 現(xiàn)代植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指南. 北京: 科學(xué)出版社. 1999

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3樓2011-04-07 16:08:15

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Originally posted by yangru.520 at 2011-04-06 22:38:40:
請問有沒有哪位做過小麥籽粒中蔗糖-淀粉轉(zhuǎn)化過程中關(guān)鍵酶（SS、SPS、ADPG-PPase、UDPG-PPase、SSS、GBSS）活性的測定。求方法。

我的郵箱是yangru.520@163.com，能否將相關(guān)方法發(fā)到我的郵箱里。希望以后有機(jī)會(huì)能和您多多交流!

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4樓2011-04-07 16:34:58

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Originally posted by 青島一逍遙 at 2011-04-07 14:47:57:
這些指標(biāo)很費(fèi)錢的說

我這有部分方法~~

我的郵箱是yangru.520@163.com，能否將相關(guān)方法發(fā)到我的郵箱里。希望以后有機(jī)會(huì)能和您多多交流!

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5樓2011-04-07 16:36:23

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引用回帖:

Originally posted by tjshan1983 at 2011-04-07 16:08:15:
SS、SPS可參考中國科學(xué)院上海植物生理研究所, 上海市植物生理學(xué)會(huì). 現(xiàn)代植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指南. 北京: 科學(xué)出版社. 1999

謝謝！

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6樓2011-04-07 16:38:33

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tjshan1983

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SS、SPS

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缺友情(金幣+1): 謝謝應(yīng)助，歡迎常來～ 2011-04-07 17:36:07

SS、SPS

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7樓2011-04-07 17:30:19

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引用回帖:

Originally posted by zjhzky at 2011-04-13 02:11:28:
其實(shí)自己就可以測，如果實(shí)在不行，你到中科院水保所找下我同學(xué)，他一直測那個(gè)。459332433QQ

好的，謝謝！

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xiongyali

9樓2011-04-13 10:19:08

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yuxinny

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植物生理學(xué)都有相關(guān)的實(shí)驗(yàn)方法的

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10樓2011-09-11 11:55:03

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我最近要做有方法你看一下郵箱但是藥品準(zhǔn)備有點(diǎn)煩多交流啊貌似我們一個(gè)專業(yè) 你是哪個(gè)學(xué)校的？

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12樓2012-03-14 09:48:41

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tyunlu

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植物生理上的方法測得不準(zhǔn)確，可以參考楊建昌教授所發(fā)的論文方法

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13樓2012-04-21 20:52:40

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xiongyali

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671095樓: Originally posted by yangru.520 at 2011-04-13 10:19:08
好的，謝謝！

你同學(xué)拒絕添加好友啊，幫忙加下我Q吧719249886，謝謝了。。

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14樓2012-06-01 16:09:43

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鵬鵬晨晨

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您好！我今年剛讀研一，也想測這些指標(biāo)，無意中看到您的帖子，請問您有這些指標(biāo)的測定方法嗎？

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15樓2013-05-29 16:28:43

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wentg1983

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11樓: Originally posted by laoganbu33 at 2011-12-04 16:22:09
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你好厲害，不知道方法出自何處？請指教！

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16樓2013-06-03 10:40:51

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tinychen

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請問如何將OD值最后計(jì)算為單位是nmol/1000seeds min的酶活呢？跪求

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17樓2013-07-04 17:56:49

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alman001

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云南三種野生稻籽粒淀粉合成關(guān)鍵酶活性測定及Waxy基因的克
隆和分析這篇學(xué)位論文里面有野生稻中ADPG、SSS、以及GBSS的測定希望對(duì)你有幫助

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18樓2013-11-12 20:06:23

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alman001

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17樓: Originally posted by tinychen at 2013-07-04 17:56:49
請問如何將OD值最后計(jì)算為單位是nmol/1000seeds min的酶活呢？跪求...

同樣的問題很煩惱請問你解決了嗎

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20樓2015-02-09 21:29:24

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baqs123419樓

2013-11-15 22:51 回復(fù)

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