 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1660 | 回復(fù): 6 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) BioEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
【求助】蛋白提取
|
|||
| 請(qǐng)問下酸會(huì)影響提細(xì)菌蛋白嗎？因?yàn)槲倚枰獙⑴囵B(yǎng)基中的難溶磷用酸溶掉才能得到菌體。謝謝。另外，提出的蛋白可以直接雙向電泳嗎？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
求材料調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
一志愿天大材料與化工（085600）總分338
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
085600材料與化工
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
085600材料與化工調(diào)劑 324分
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
286求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
焦慮
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
344求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
266求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
化學(xué)工程321分求調(diào)劑
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
314求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 榛子蛋白提取方法
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 如何提取有活性的蛋白質(zhì)？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 蛋白提取
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 雙向蛋白提取，有沒有提出的總蛋白，是干粉狀的直接可以跑雙向的
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 牛腱膠原蛋白的提取問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 柞蠶總RNA提取中，蛋白抽提不盡
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 動(dòng)物細(xì)胞蛋白提取含量低
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)問用RIPA裂解液裂解后的蛋白能做ELISA嗎？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】核蛋白的提取，有誰知道具體方案？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】真菌蛋白提取
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助】植物蛋白質(zhì)提取純化方法
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助】蛋白提取率的問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】植物蛋白提取方法討論
已經(jīng)有14人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
坐標(biāo)上海，誠(chéng)征女友，非常 著急，私信必回
+1/469
-
南京大學(xué)智能驅(qū)動(dòng)與感知材料實(shí)驗(yàn)室誠(chéng)招博士/碩士/科研助理/訪問學(xué)生
+1/279
-
西湖大學(xué)工學(xué)院智能微型機(jī)器人實(shí)驗(yàn)室博士后招聘啟事
+4/228
-
濟(jì)南大學(xué)林秀娟教授招收材料類博士生
+1/90
-
中國(guó)藥科大學(xué)211-課題組招收2026博士/碩士
+1/64
-
0854電子信息調(diào)劑，閩南師大光電芯片研發(fā)實(shí)驗(yàn)室，柯少穎教授課題組，集成電路
+1/44
-
2026年重慶工商大學(xué)管理科學(xué)與工程專業(yè)學(xué)術(shù)碩士招生調(diào)劑，風(fēng)景總在柳暗花明處
+1/36
-
西北工業(yè)大學(xué)光子學(xué)研究團(tuán)隊(duì)誠(chéng)聘博士后！
+2/36
-
2026年工科碩士調(diào)劑-上海大學(xué)全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室團(tuán)隊(duì)-材料數(shù)據(jù)挖掘方向-研究生3-5人
+1/30
-
南開大學(xué)羅景山教授課題組招收2026年入學(xué)博士生（光/電催化方向）
+2/14
-
南京林業(yè)大學(xué)-國(guó)家級(jí)青年人才團(tuán)隊(duì) 招2026級(jí)申請(qǐng)考核制博士（合成化學(xué)、植物化學(xué)方向）
+1/14
-
中國(guó)民航飛行學(xué)院先進(jìn)連接團(tuán)隊(duì)招收航空宇航、航空機(jī)械專業(yè)碩士研究生（學(xué)碩專碩均可）
+1/11
-
南京林業(yè)大學(xué)有機(jī)功能分子實(shí)驗(yàn)室博士生招生啟事
+1/8
-
武漢紡織大學(xué)杰青團(tuán)隊(duì)招研究生（材料，化學(xué)，高分子，化工）
+1/8
-
聊城大學(xué)化院青椒招收化學(xué)相關(guān)專業(yè)調(diào)劑學(xué)生
+1/7
-
南京林業(yè)大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院柏惺峰課題組招收2026年申請(qǐng)考核制博士2名
+1/7
-
上海師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院任新意副研究員招收調(diào)劑學(xué)生3-4名（有機(jī)化學(xué)專業(yè)）
+1/5
-
課題組招收環(huán)境及相關(guān)專業(yè)調(diào)劑碩士研究生（歡迎優(yōu)秀學(xué)生加入）
+1/2
-
323分控制工程求調(diào)劑
+1/2
-
中國(guó)質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)科學(xué)研究院招收聯(lián)合培養(yǎng)研究生
+1/1
4樓2011-04-13 09:00:21
HarveyWang
捐助貴賓 (知名作家)
- BioEPI: 14
- 應(yīng)助: 80 (初中生)
- 金幣: 2277.2
- 帖子: 6880
- 在線: 946小時(shí)
- 蟲號(hào): 528557
★ ★
amisking(金幣+2, EPI+1): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流。 2011-04-12 21:45:46
tangchaoxi(金幣+3): 2011-04-13 08:45:56
amisking(金幣+2, EPI+1): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流。 2011-04-12 21:45:46
tangchaoxi(金幣+3): 2011-04-13 08:45:56
|
后面看到，你的蛋白是用來做雙向電泳的，而不是測(cè)活的。 因此，低pH的酸應(yīng)該影響不到蛋白吧。 關(guān)鍵是你加酸量有多少？ 難道要加100 mM的HCl處理 一小時(shí)？ 那菌體估計(jì)都要破掉了。 你的菌體的獲得很麻煩嗎？難道是生長(zhǎng)在磷酸鈣之類的上面？ 菌體提取的蛋白，要分成幾類： 1）最簡(jiǎn)單的，可溶性上清中的蛋白: 去除鹽類后，可以做雙向電泳的樣品。 2）膜蛋白，因?yàn)榭扇苄圆�，需要特殊的試劑處理，增加其在第一維電泳時(shí)的可溶性。具體的你得去查論文，這里只是提示一下。 另外，實(shí)際上，對(duì)于全細(xì)胞蛋白，雙向電泳許多時(shí)候會(huì)過濾掉很多蛋白點(diǎn)的！ 選擇雙向電泳Loading buffer 組分很關(guān)鍵。 |
2樓2011-04-12 17:41:10
3樓2011-04-13 08:50:37
HarveyWang
捐助貴賓 (知名作家)
- BioEPI: 14
- 應(yīng)助: 80 (初中生)
- 金幣: 2277.2
- 帖子: 6880
- 在線: 946小時(shí)
- 蟲號(hào): 528557
tangchaoxi(金幣+3): 2011-04-13 20:28:37
|
絕對(duì)不可以。 濃鹽酸會(huì)溶解細(xì)胞，1min 內(nèi)就溶解了，然后大部分蛋白被酸沉。 酸，即使50 mM HCl，也會(huì)沉淀許多細(xì)胞蛋白。 我覺得你沒必要非要這時(shí)候去除磷酸鈣。 你可以在破碎菌體時(shí)離心去除的。 你如果是做菌體上清蛋白，而發(fā)酵液沒有其他固體培養(yǎng)基的話， 建議你在pH8-10之間，直接超聲破碎 發(fā)酵液沉淀（就是磷酸鈣+菌體）， 然后在4℃ 10000 rpm 離心10-20min, 這樣，磷酸鈣都沉淀了， 取上清即可。 如果想溶解更多的膜蛋白（或全菌體蛋白），需要用2D電泳的Loading Buffer 加入發(fā)酵液沉淀，來直接超聲破碎沉淀，然后在4℃ 10000 rpm 離心10-20min，取上清。 如果想鑒定破碎液的蛋白， 就用SDS -PAGE電泳 loading buffer, 加入樣品后沸水浴3-5min，離心，上樣即可。 你看如何？ [ Last edited by HarveyWang on 2011-4-13 at 18:40 ] |
5樓2011-04-13 18:34:09
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限 +5 | share_joy | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿武理材料305分求調(diào)劑 +3 | 想上岸的鯉魚 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑（0805） +5 | 煙汐憶海 2026-03-16 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 陌宸希 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛生物生物愛?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +8 | 大可digkids 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +3 | 志存高遠(yuǎn)意在機(jī)?/a> 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +9 | 負(fù)心者當(dāng)誅 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，總分315，考的生物醫(yī)藥，一志愿湖南師范大學(xué)。調(diào)劑到任何專業(yè)都可以 +4 | 小丁想進(jìn)步 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 285化工學(xué)碩求調(diào)劑（081700） +9 | 柴郡貓_ 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿，福州大學(xué)材料專碩339分求調(diào)劑 +3 | 木子momo青爭(zhēng) 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703 物理化學(xué)調(diào)劑 +3 | 我可以上岸的對(duì)?/a> 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 26考研一志愿中國(guó)石油大學(xué)(華東)305分求調(diào)劑 +3 | 嘉年新程 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +4 | 威化餅07 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] （081700）化學(xué)工程與技術(shù)-298分求調(diào)劑 +12 | 11啦啦啦 2026-03-11 | 35/1750 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)學(xué)校調(diào)劑 +3 | 周56 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +5 | 超級(jí)伊昂大王 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑（食品/專碩） +3 | xc321 2026-03-12 | 6/300 |
|