 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3403 | 回復(fù): 13 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
chui2004鐵桿木蟲 (正式寫手)
|
[交流]
【求助/交流】大腸桿菌轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，出來(lái)的不是我要的了，怎么回事？ 已有8人參與
|
|||
|
最近在做質(zhì)粒構(gòu)建的工作，當(dāng)沒有完成最終構(gòu)建之前，質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化大腸桿菌都很正常，而且很容易轉(zhuǎn)化成功，但是將質(zhì)粒構(gòu)建成功后，轉(zhuǎn)化大腸桿菌變得非常困難，而且DH5a轉(zhuǎn)不進(jìn)去;JM109，TOP10轉(zhuǎn)入后，跑電泳比我的目的質(zhì)粒小了，做雙酶切檢定，不是我要的質(zhì)粒載體，這是怎么回事呢？ 我做的是一個(gè)重組酶的載體，原始載體是pBV220，將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中，在30°培養(yǎng)時(shí)，重組酶是否表達(dá)？原因是我在沒誘導(dǎo)之前，質(zhì)粒DNA已經(jīng)發(fā)生了部分的重組。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有221人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 如何把質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 大腸桿菌轉(zhuǎn)化問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 有木有大腸桿菌單拷貝的表達(dá)質(zhì)粒？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌野生菌中驗(yàn)證遇到的非常非常怪的問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 大腸桿菌在搖瓶中休眠是怎么回事
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 提取大腸桿菌質(zhì)粒失敗的原因
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】求助大腸桿菌和紅球菌穿梭質(zhì)粒載體在哪能買到
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌越搖越清，怎么回事
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌，農(nóng)桿菌質(zhì)粒
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】釀酒酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌
已經(jīng)有11人回復(fù)
chui2004
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 16 (小學(xué)生)
- 金幣: 6147.9
- 紅花: 2
- 帖子: 370
- 在線: 96.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 325716
- 注冊(cè): 2007-03-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 腫瘤生物治療
|
我將構(gòu)建好的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)入從某個(gè)公司買的E.clio DH5a感受態(tài)，這個(gè)感受態(tài)是個(gè)突變株，我這個(gè)質(zhì)粒能轉(zhuǎn)化進(jìn)去（提的質(zhì)粒測(cè)序，序列正確），但是轉(zhuǎn)正常的DH5a就轉(zhuǎn)不進(jìn)去。 當(dāng)轉(zhuǎn)BL21時(shí)，質(zhì)粒能進(jìn)去，在30°培養(yǎng)時(shí)，出來(lái)了比目的質(zhì)粒小的質(zhì)粒，我將提出來(lái)的質(zhì)粒做雙酶切，與我的目的質(zhì)粒的雙酶切電泳圖是一致的，因此，我是否可以判斷我的質(zhì)粒（原始質(zhì)粒是pBV220)在30°時(shí)，重組酶已經(jīng)表達(dá)了。 我現(xiàn)在很郁悶�。〔恢涝撛趺赐伦隽�。 |
4樓2011-04-13 08:23:50
zhaohq1209
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 5
- 應(yīng)助: 41 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.034
- 金幣: 10666.7
- 散金: 587
- 紅花: 12
- 帖子: 2113
- 在線: 333.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 243823
- 注冊(cè): 2006-04-15
- 專業(yè): 病原細(xì)菌、細(xì)菌感染與宿主
2樓2011-04-12 22:21:19
天使托
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
-
專家經(jīng)驗(yàn): +57 - MolEPI: 106
- 應(yīng)助: 95 (初中生)
- 貴賓: 0.263
- 金幣: 16348.8
- 散金: 593
- 紅花: 74
- 沙發(fā): 9
- 帖子: 3652
- 在線: 289小時(shí)
- 蟲號(hào): 441757
- 注冊(cè): 2007-10-27
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
- 管轄: 微生物
3樓2011-04-12 22:26:23
天使托
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
-
專家經(jīng)驗(yàn): +57 - MolEPI: 106
- 應(yīng)助: 95 (初中生)
- 貴賓: 0.263
- 金幣: 16348.8
- 散金: 593
- 紅花: 74
- 沙發(fā): 9
- 帖子: 3652
- 在線: 289小時(shí)
- 蟲號(hào): 441757
- 注冊(cè): 2007-10-27
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
- 管轄: 微生物
★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
西瓜(金幣+4): 繼續(xù)加油啊～ 2011-04-13 10:31:36
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
西瓜(金幣+4): 繼續(xù)加油啊～ 2011-04-13 10:31:36
|
1：你說(shuō)你轉(zhuǎn)正常的DH5a轉(zhuǎn)不進(jìn)去，轉(zhuǎn)從公司買來(lái)的DH5a突變株就可以，這其實(shí)很正常，因?yàn)橥蛔冎暧锌赡軙?huì)導(dǎo)致你的質(zhì)粒掛掉。。。 2：你轉(zhuǎn)BL21時(shí)，雖說(shuō)質(zhì)粒比目的質(zhì)粒小，很正常，因?yàn)橘|(zhì)粒在細(xì)菌中的狀態(tài)是不斷變化的，唯一驗(yàn)證的方法就是酶切，既然你現(xiàn)在酶切驗(yàn)證沒什么問題，說(shuō)明你的重組載體是沒有任何問題的，至于你說(shuō)的重組酶是否已經(jīng)表達(dá)有何證據(jù)？基因連接到載體上面就一定會(huì)表達(dá)嗎？即便你這個(gè)載體也是表達(dá)的載體，不知道你要表達(dá)這個(gè)重組酶是否需要添加誘導(dǎo)劑呢？ |
5樓2011-04-13 10:14:08
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 本科雙非材料，跨考一志愿華電085801電氣，283求調(diào)劑，任何專業(yè)都可以 +6 | 芝士雪baoo 2026-03-28 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求調(diào)劑 +7 | 芋泥小鈴鐺 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +4 | Qshers 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 315求調(diào)劑 +4 | akie... 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +5 | 蕉蕉123 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085602 化工專碩 338分 求調(diào)劑 +12 | 路癡小琪 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 蘆lty 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +8 | 邱gl 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085600 286分 材料求調(diào)劑 +7 | 麻辣魷魚 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085404求調(diào)劑，總分309，本科經(jīng)歷較為豐富 +4 | 來(lái)財(cái)aa 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 086502化學(xué)工程342求調(diào)劑 +6 | 阿姨復(fù)古不過 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +10 | 幸運(yùn)的醬醬 2026-03-22 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑，一志愿南農(nóng)083200食品科學(xué)與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +10 | 你好明天你好 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 丹青奶蓋 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境專碩324分求調(diào)劑推薦 +5 | 軒小寧—— 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +7 | 加一一九 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 289材料與化工（085600）B區(qū)求調(diào)劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩找調(diào)劑 +5 | 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化工專碩求調(diào)劑 +3 | question挽風(fēng) 2026-03-24 | 3/150 |
|