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【求助/交流】連接轉(zhuǎn)化 已有8人參與
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| 我最近做原核表達(dá)，但是目的片段和質(zhì)粒都雙酶切后連接不成功，不知道是什么問題，請(qǐng)各位賜教！ |
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7樓2011-04-14 11:04:22
天使托
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T.Shen
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西瓜(金幣+2, EPI+1): 分析得很全面了，贊！ 2011-04-12 23:53:46
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西瓜(金幣+2, EPI+1): 分析得很全面了，贊！ 2011-04-12 23:53:46
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1：質(zhì)粒酶切的是否徹底，還有基因呢？如果酶切的不夠徹底的話，肯定影響連接效率了； 2：你連接體系的設(shè)計(jì)，如果基因和質(zhì)粒的量不合適，也會(huì)影響連接效率滴； 3：連接時(shí)間呢？ 4：篩選過程，你可以先進(jìn)行PCR驗(yàn)證，然后提取質(zhì)粒酶切進(jìn)行驗(yàn)證。 總之這個(gè)連接轉(zhuǎn)化是分子生物學(xué)最基礎(chǔ)的技術(shù)了，一定得扎實(shí)了，這樣對(duì)于后期實(shí)驗(yàn)有很大幫助。 祝好運(yùn)！ |
2樓2011-04-12 22:23:16
zhaohq1209
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西瓜(金幣+3): 個(gè)人也覺得雙酶切出問題可能性比較大 2011-04-12 23:54:35
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西瓜(金幣+3): 個(gè)人也覺得雙酶切出問題可能性比較大 2011-04-12 23:54:35
3樓2011-04-12 22:23:44
xiaoyu1014126
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4樓2011-04-13 12:23:35
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