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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » PCR跑不出目的片段
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PCR跑不出目的片段
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用beacon designer7.9設計了4對引物，分2次送出合成。就是跑不出片段。片段大分別是：571、699、626、652bp。 我換了DEPC水，重新提了RNA，跑了溫度梯度，引物梯度，模板梯度，還用他人用的正常的cDNA跑，都不行，沒有目得片段，但有引物二聚體。內參-action能跑出來，很亮，測了提取的RNA OD值，各項正常。 我跑的基因mRNA序列2525bp，有3個外顯子，CDS區(qū)在第三個外顯子里，前兩個外顯子片段很短，共388bp。我設計的引物上游在前兩個外顯子里，下游在第三個外顯子里。另外，我開始在CDS區(qū)（第三個外顯子里）設計的引物都跑出來了，很好。 引物稀釋沒問題，我跟內參一起稀釋的，并且我有2管，都稀釋了，都泡了PCR。 引物各種參數(shù)都正常，軟件評分都很高。就是有的個別引物的錯配有點高，但3和5端沒有錯配。 [ Last edited by zsdk on 2011-5-19 at 09:31 ] |
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5樓2011-05-19 16:34:38
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