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swallow52u銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
PCR的電泳結(jié)果是除了Marker能出來條帶，其他都是什么都沒有
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我是做的RT-PCR做的細(xì)胞的，在提取完RNA后我做了電泳和濃度測定，結(jié)果都還不錯。也順利的反轉(zhuǎn)錄成了CDNA，在做β-actin的PCR時，結(jié)果很好，條帶也比較清楚。我還做了兩遍，先是做了正常對照組的，接著跑了所有樣本的β-actin，所有樣都出來了，但我現(xiàn)在已經(jīng)重復(fù)不出來了，條件設(shè)置的都一樣！我也思考了下原因，可能是CDNA降解了？或者是引物污染了？我只能想到這么多��？請各位高手幫幫我啊，我的實驗該怎樣改進？謝謝了？現(xiàn)在的PCR的電泳結(jié)果是除了Marker能出來條帶，其他都是什么都沒有。愁死我了��！ 我的PCR體系是 PCR步驟: 20ul體系 MIX 10uL cDNA 1 uL 引物上游 1 uL， 引物下游 1 uL DEPC H2O 補足20ul 加樣的順序也是這樣的，不知道合適不？ PCR上機設(shè)置溫度: 處理 溫度 時間 預(yù)變性 94℃ 5min 變性 94℃ 30s 退火 根據(jù)說明上下浮動2℃ 45s 延伸 72℃ 30s 循環(huán) 35 從第2個開始 45s/個 延伸 72 7min 4℃ Forever [ Last edited by 1949stone on 2011-5-20 at 17:59 ] |
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9樓2011-05-20 16:22:21
swallow52u
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我的PCR體系是 PCR步驟: 20ul體系 MIX 10uL cDNA 1 uL 引物上游 1 uL， 引物下游 1 uL DEPC H2O 補足20ul 加樣的順序也是這樣的，不知道合適不？ PCR上機設(shè)置溫度: 處理 溫度 時間 預(yù)變性 94℃ 5min 變性 94℃ 30s 退火 根據(jù)說明上下浮動2℃ 45s 延伸 72℃ 30s 循環(huán) 35 從第2個開始 45s/個 延伸 72 7min 4℃ Forever |
2樓2011-05-20 01:55:39
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4樓2011-05-20 10:08:54
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