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xingqing3026新蟲 (小有名氣)
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[求助]
拜托各位個人幫忙分析下這是什么情況，好神奇呀
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PCR產(chǎn)物跑膠出現(xiàn)了這種情況，第一張圖為什么整個泳道都是亮的呢？這是反轉(zhuǎn)錄的cDNA進(jìn)行PCR的結(jié)果 第二張圖是普通的PCR結(jié)果有些泳道里出現(xiàn)藍(lán)紫色的光，是什么原因呢？ 拜托大家?guī)兔Ψ治鱿?br /> |
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 【分子生物】EPI帖 |
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- 幫忙看下這是什么柱子，謝謝
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- PCR電泳圖怎么會這樣？各位幫忙分析一下吧
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5, EPI+1): cDNA本來就是各種大小的都有，cDNA加多了看起來就是這樣子。藍(lán)光的解釋也挺合理。 2011-05-26 16:27:17
xingqing3026(金幣+5): 嘿嘿，謝謝 2011-05-26 16:33:50
西瓜(金幣+5, EPI+1): cDNA本來就是各種大小的都有，cDNA加多了看起來就是這樣子。藍(lán)光的解釋也挺合理。 2011-05-26 16:27:17
xingqing3026(金幣+5): 嘿嘿，謝謝 2011-05-26 16:33:50
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...，你的cdNA里面怎么會有DNA的，cDNA模版或者Taq加太多了吧，你是要P多大的片段啊。 至于那什么藍(lán)光，一點(diǎn)也不神奇，你膽子倒挺大的，直接對著紫外就拍照了？你看道德藍(lán)紫色的光就是你的高濃度片段和紫外線顏色的混合顏色，哈哈 |
2樓2011-05-26 15:49:33
beautybanana
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5, EPI+1): 很好~ 2011-05-26 16:25:30
xingqing3026(金幣+5): 謝謝呢，嘿嘿主要是我平時一直這樣操作的，第一次見這樣的 2011-05-26 16:42:05
西瓜(金幣+5, EPI+1): 很好~ 2011-05-26 16:25:30
xingqing3026(金幣+5): 謝謝呢，嘿嘿主要是我平時一直這樣操作的，第一次見這樣的 2011-05-26 16:42:05
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第一張圖，是DNA電泳拖尾，主要從以下兩個方面考慮： 1、PCR產(chǎn)物自身原因： 可能是由于酶量過多或酶的質(zhì)量差，dNTP濃度過高，Mg2+濃度過高，退火溫度過低，循環(huán)次數(shù)過多，而造成PCR的非特異性產(chǎn)物 過多。此外是模板的質(zhì)量問題，模板不純的話若是含有RNA的話也會出現(xiàn)拖尾，再者是DNA降解的可能。 2、電泳體系的問題： （1）電泳緩沖液TAE或者TBE的污染，建議更換緩沖液。（2）上樣時樣品漂了，建議增加上樣緩沖液的用量，以及小心加樣。（3）電壓太高。（4）電泳時間過長 第二張圖，DNA的顏色為藍(lán)紫光，可能和你拍照的背景有關(guān)系，如果不是，你可以好好研究研究了~ |
3樓2011-05-26 16:06:27
西瓜
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7樓2011-05-26 16:39:47
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嘻嘻，凝膠成像拍出來是這種效果：10樓2011-05-26 16:48:32
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