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xingqing3026新蟲 (小有名氣)
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[求助]
拜托各位個人幫忙分析下這是什么情況,好神奇呀
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PCR產(chǎn)物跑膠出現(xiàn)了這種情況,第一張圖為什么整個泳道都是亮的呢?這是反轉錄的cDNA進行PCR的結果 第二張圖是普通的PCR結果有些泳道里出現(xiàn)藍紫色的光,是什么原因呢? 拜托大家?guī)兔Ψ治鱿?br /> |
【分子生物】EPI帖 |
榮譽版主 (知名作家)
木蟲 (正式寫手)
木蟲 (著名寫手)
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第一張圖,是DNA電泳拖尾,主要從以下兩個方面考慮: 1、PCR產(chǎn)物自身原因: 可能是由于酶量過多或酶的質量差,dNTP濃度過高,Mg2+濃度過高,退火溫度過低,循環(huán)次數(shù)過多,而造成PCR的非特異性產(chǎn)物 過多。此外是模板的質量問題,模板不純的話若是含有RNA的話也會出現(xiàn)拖尾,再者是DNA降解的可能。 2、電泳體系的問題: (1)電泳緩沖液TAE或者TBE的污染,建議更換緩沖液。(2)上樣時樣品漂了,建議增加上樣緩沖液的用量,以及小心加樣。(3)電壓太高。(4)電泳時間過長 第二張圖,DNA的顏色為藍紫光,可能和你拍照的背景有關系,如果不是,你可以好好研究研究了~ |
木蟲 (著名寫手)
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