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◆細(xì)胞菜鳥問個(gè)養(yǎng)細(xì)胞的基礎(chǔ)問題◆
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正在自己拿著說明書養(yǎng)PC12細(xì)胞 1.細(xì)胞在培養(yǎng)皿中所占的面積約70% 2.加臺盼藍(lán)計(jì)數(shù)后，進(jìn)行傳代，要求細(xì)胞的推薦播種濃度為1.5×10的5次方/ml 說道細(xì)胞的個(gè)數(shù)，怎么會用體積單位，怎么算的。然后在培養(yǎng)皿中所占面積又是怎么計(jì)算的？ 菜鳥求大俠幫組啊，給金幣! [ Last edited by cddryw on 2011-5-26 at 18:01 ] |
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5樓2011-05-30 20:41:19
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3樓2011-05-27 16:07:39
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【答案】應(yīng)助回帖
cddryw(金幣+10): 非常詳細(xì)，就喜歡這樣的回答，謝謝. 2011-05-30 21:39:16
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其實(shí)說明書說的和實(shí)際中操作還是有很大的差別的，當(dāng)然按照說明書操作最好~~~ 樓上說的其實(shí)也很明白了，對于初學(xué)者，我在具體說一下： ①細(xì)胞占培養(yǎng)皿（其實(shí)最好用培養(yǎng)瓶，污染的幾率相對小一些）面積的70%就是細(xì)胞生長到對數(shù)生長期時(shí)期的狀態(tài)，當(dāng)然一般都是目測，80%也沒有關(guān)系，但是最好不要等到細(xì)胞長滿整個(gè)底部再去消化傳代，那時(shí)候就有些晚了~~~ ②細(xì)胞計(jì)數(shù)：最簡單的就是用細(xì)胞計(jì)數(shù)板，至于加臺盼藍(lán)染色，我們平時(shí)操作都沒有，還有就是傳代的時(shí)候根本不計(jì)數(shù)，但是還介紹一下細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法，以后在做相關(guān)細(xì)胞試驗(yàn)需要細(xì)胞計(jì)數(shù)的時(shí)候也可用得上：首先消化離心后，棄去離心管內(nèi)的培養(yǎng)基，加入定量的培養(yǎng)基，吹散細(xì)胞，然后取一滴滴于細(xì)胞計(jì)數(shù)板一側(cè)的邊緣邊緣處，然后在顯微鏡下觀察透過蓋玻片下的那四個(gè)象限的細(xì)胞數(shù)，取均數(shù)，用以下公式算得每mL的細(xì)胞懸液里面細(xì)胞的個(gè)數(shù)：均數(shù)×10（4次方），即為每mL里面細(xì)胞所含個(gè)數(shù)。 如果之前沒有養(yǎng)過細(xì)胞，最重要的就是如何防止污染，還有就是邊凍存，邊做實(shí)驗(yàn)。 祝好運(yùn)~~~  |
4樓2011-05-30 20:37:20
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