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shaquila金蟲 (正式寫手)
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[交流]
關(guān)于洋蔥表皮亞細(xì)胞定位的問題～～ 已有7人參與
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構(gòu)建好了GFP fusion載體，本來是要用基因槍的，后面發(fā)現(xiàn)做不了 問問能不能用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法做，我自己試試一下，方法如下，但是貌似沒有侵染進(jìn)去，請(qǐng)問需要怎么改進(jìn)？ 2.8盤1洋蔥表皮預(yù)培養(yǎng) 用鑷子撕取洋蔥里表皮 1cm2小塊放在MS培養(yǎng)基上，28℃預(yù)培養(yǎng)5h。 2.83)侵染液制備 將菌液加入含抗生素的LB培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜，5000離心5分鐘，收集菌體，LB重懸浮，分光光度計(jì)測(cè)定菌液濃度，其濃度調(diào)至OD＝1左右。 2.83)浸染 將上述菌液倒入到預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基中，泡 30min，期間搖動(dòng)數(shù)次。倒去菌液，將洋蔥表皮置于滅菌濾紙上吸干表面菌液。 接入共培養(yǎng)培養(yǎng)基（MS培養(yǎng)基加AS），28℃暗培養(yǎng)2天觀察。 |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-20 10:38:39
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-20 10:38:39
| 洋蔥表皮瞬時(shí)表達(dá)實(shí)驗(yàn)時(shí)用的是洋蔥表皮的內(nèi)表皮，里面只有一個(gè)細(xì)胞核 和一個(gè)大的液胞，基本上沒有別的了，據(jù)我觀察是沒有葉綠體的，所以建議不要用洋蔥表皮做你這個(gè)基因。你可以做別的比如說融合GUS 轉(zhuǎn)化擬南芥煙草之類，進(jìn)行染色，綠色組織中有，根中沒有，不知這樣能不能證明定位在葉綠體中，不過比較麻煩一點(diǎn)！ |
7樓2014-06-19 20:20:59
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3樓2011-06-13 23:43:59
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4樓2011-06-14 10:02:34
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5樓2012-12-20 16:21:27
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