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yoyoyoyo3985金蟲 (小有名氣)
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[交流]
雙酶切連接表達(dá)載體，兩個(gè)月都沒(méi)做出來(lái)，問(wèn)題到底出在哪里呢~？求指點(diǎn) 已有25人參與
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我現(xiàn)在在做一個(gè)基因的昆蟲表達(dá)，表達(dá)載體是用的是pFast HT A（載體有4850bp）。我的基因目前上到了PMD18-T的載體上，帶酶切位點(diǎn)，已經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證了，基因和酶切位點(diǎn)及保護(hù)堿基都是完整正確的，內(nèi)切酶用得是Hind III 和Spe I 酶切回收的片段和載體質(zhì)量都還不錯(cuò)，條帶明亮單一，濃度約為50ng/ul 反復(fù)做了好多次，T4連接酶過(guò)夜連接 做轉(zhuǎn)化，都是不長(zhǎng)斑。 隱形對(duì)照加的酶切后的空載體，陽(yáng)性對(duì)照用得是未酶切的載體，結(jié)果也沒(méi)問(wèn)題。 T4連接酶買的新的，感受態(tài)也是新的。 那么我的問(wèn)題到底出在哪里呢？ 求高手指點(diǎn)。非常感謝，現(xiàn)在做的都快吐了…… |
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9樓2011-06-22 11:03:29
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2樓2011-06-22 10:06:56
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3樓2011-06-22 10:13:03
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4樓2011-06-22 10:21:34
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