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2006tuyi金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
電轉(zhuǎn)化以及抽質(zhì)粒問(wèn)題 已有3人參與
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| 將穿梭質(zhì)粒pMG36E（紅霉素抗性）電轉(zhuǎn)到乳酸片球菌里面（野生型的），涂板后長(zhǎng)出單菌落，然后同時(shí)將一個(gè)單菌落接種到液體培養(yǎng)基以及接種到另一塊新鮮的帶有抗生素的的平板上，液體培養(yǎng)菌體長(zhǎng)好后抽質(zhì)粒抽得出來(lái)，證明轉(zhuǎn)進(jìn)去了。可是從轉(zhuǎn)涂的平板上挑菌落養(yǎng)菌抽質(zhì)粒卻怎么也抽不出來(lái)，這是為什么��？ |
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5樓2017-11-30 23:26:24
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
1949stone(EPI+1): epi大神 2011-06-28 17:45:27
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
1949stone(EPI+1): epi大神 2011-06-28 17:45:27
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1：很有可能是你沒(méi)有將質(zhì)粒提取出來(lái)，即便你的培養(yǎng)基上的抗生素抗性喪失，質(zhì)粒也不會(huì)那么容易丟的；所以你重復(fù)一下，看看是否可以提取出來(lái)。 2：你挑取的兩個(gè)單克隆中，是不是同一批長(zhǎng)出來(lái)的，如果一個(gè)大一個(gè)小的話，很有可能小的是衛(wèi)星菌落，就是不帶質(zhì)粒的； 祝好運(yùn)！ |
2樓2011-06-28 16:30:39
2006tuyi
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| 我重復(fù)好多次了，都是抽不出來(lái)，而且覺(jué)得抽質(zhì)粒方法應(yīng)該沒(méi)什么問(wèn)題。我做過(guò)3次電轉(zhuǎn)，第一次直接從電轉(zhuǎn)后涂的板上挑菌（挑了5個(gè)），長(zhǎng)好后抽質(zhì)粒（分三次抽的），都能抽出來(lái)。補(bǔ)充一下，我是用革蘭氏陰性菌的質(zhì)粒小抽試劑盒配合溶菌酶進(jìn)行抽的，加入溶液1的同時(shí)添加15mg/mL的溶菌酶，37度30分鐘，然后再按照說(shuō)明書(shū)一步步來(lái)做的。而且我上面講的涂板和接種到液體培養(yǎng)基挑的是同一個(gè)菌落（用接種針挑一半劃線用牙簽將另外一半挑到液體培養(yǎng)基中）。 |
3樓2011-06-28 20:28:42
4樓2015-07-31 16:08:11
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