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[求助]
western和PCR選擇問題
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| 做細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)，想測定caspase-3,9蛋白，想問下是用半定量PCR還是western對其進(jìn)行測定比較好？是不是都是說明凋亡問題，哪個更好一點(diǎn)，還是其中一個用PCR另一個用western？請詳細(xì)說明一下二者的區(qū)別，測定后分別能說明的問題！新手請教高手幫忙��！ |
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7樓2011-06-30 13:35:28
cdl007
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-06-30 07:42:45
癟(金幣+2): 2011-06-30 19:18:32
dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-06-30 07:42:45
癟(金幣+2): 2011-06-30 19:18:32
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Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階段，它被激活，活化的Caspase-3由兩個大亞基（17KD）和兩個小亞基（12KD）組成，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。但在細(xì)胞凋亡的晚期和死亡細(xì)胞，caspase-3的活性明顯下降。 一般檢測凋亡要有pro-caspase3（32KD）減少的趨勢，活化caspase3（17KD）增加的趨勢。這是指western PCR 需要做一下的，但是結(jié)果不一定和western的一致。因?yàn)閏aspase的變化主要是蛋白的活化。 caspase9 買相應(yīng)抗體即可 |
2樓2011-06-30 06:57:30
terry130
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
癟(金幣+3): 2011-06-30 19:18:27
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檢測凋亡的話用PCR沒用，mRNA水平的變化不能直接聯(lián)系到凋亡水平上。你需要做更直接的檢測，比如LS說的caspase3 cleavage實(shí)驗(yàn)。 除此之外，還有很多其他手段檢測細(xì)胞凋亡。 比如roche的 Cell death Elisa 試劑盒 酶學(xué)檢測來測定caspase 3 activity（這個也有專門的試劑盒） 或者更直接點(diǎn)用凋亡敏感的染料直接染細(xì)胞 如PI、ANNEXIN V等，直接鏡檢或者上流式細(xì)胞儀都可以。 現(xiàn)在的文章中比較主流的數(shù)據(jù)都是一些試劑盒或者是流式的數(shù)據(jù)。這些比較可信。 |
3樓2011-06-30 07:45:01
4樓2011-06-30 10:05:28
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