 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1737 | 回復(fù): 7 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
friya0910新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
[求助]
酶切的相關(guān)問(wèn)題
|
|||
| 本人做蛋白的體外表達(dá)，現(xiàn)在已把目的片段連接到T載體測(cè)序（測(cè)序中），上、下游引物分別含有NcoI和BamHI酶切位點(diǎn)，可是突然發(fā)現(xiàn)我的T載體在TA克隆位點(diǎn)附近（不超過(guò)10個(gè)堿基）也有BamHI酶切位點(diǎn)，那我后續(xù)要用這兩個(gè)酶雙酶切T載體獲得目的基因的話，載體上的BamHI酶切位點(diǎn)對(duì)我后續(xù)實(shí)驗(yàn)的影響大不大啊？懇請(qǐng)高人指點(diǎn)一下！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有170人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- PCR產(chǎn)物凝膠回收、酶切等問(wèn)題請(qǐng)教
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求助 雙酶切驗(yàn)證陽(yáng)性克隆的問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 表達(dá)載體構(gòu)建的相關(guān)問(wèn)題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 單酶切，酶連之后驗(yàn)證問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求，原核表達(dá)相關(guān)問(wèn)題？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】單酶切酶和DNA的比例，體系大小的問(wèn)題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】酶切連接后的分子大小問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于酶切產(chǎn)物連接的一點(diǎn)問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒pPICZA酶切問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】酶切滅活問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
friya0910
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 19.4
- 散金: 360
- 帖子: 401
- 在線: 77.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1073675
- 注冊(cè): 2010-08-12
- 專業(yè): 作物分子育種
3樓2011-07-05 19:18:46
冼亮淀粉酶
專家顧問(wèn) (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專家經(jīng)驗(yàn): +248 - MolEPI: 46
- 應(yīng)助: 257 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19459.9
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6586
- 在線: 2777.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 856414
- 注冊(cè): 2009-09-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
- 管轄: 微生物
★ ★ ★
dhd997(金幣+3): good 2011-07-05 19:16:53
amisking: 2011-07-05 20:04:13
dhd997(金幣+3): good 2011-07-05 19:16:53
amisking: 2011-07-05 20:04:13
|
BamHI雖然說(shuō)活力比較高，但是也不排除可能有失效或者操作不當(dāng)造成酶切不完全，只能切去其中一個(gè)位點(diǎn)的情況，因?yàn)檫@兩個(gè)位點(diǎn)相隔很近，跑膠的時(shí)候是看不出10個(gè)堿基的差別的，這樣就可能造成回收的外源片段中有一部分還帶有幾個(gè)載體上的堿基。 我建議你設(shè)計(jì)引物的時(shí)候不要選用載體上存在的酶切位點(diǎn)，消除這個(gè)隱患。 |
2樓2011-07-05 18:57:15
冼亮淀粉酶
專家顧問(wèn) (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專家經(jīng)驗(yàn): +248 - MolEPI: 46
- 應(yīng)助: 257 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19459.9
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6586
- 在線: 2777.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 856414
- 注冊(cè): 2009-09-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
- 管轄: 微生物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
西瓜(金幣+3): 學(xué)習(xí)了！ 2011-07-05 19:59:52
amisking(EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-05 20:04:19
西瓜(金幣+3): 學(xué)習(xí)了！ 2011-07-05 19:59:52
amisking(EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-05 20:04:19
|
不過(guò)話說(shuō)回來(lái)，你為什么要先TA克隆呢？如果PCR出來(lái)之后直接將表達(dá)載體和外源片段雙酶切，然后連接，再轉(zhuǎn)化大腸桿菌，挑取陽(yáng)性單克隆培養(yǎng)提質(zhì)粒，這時(shí)候再測(cè)序就省事了，也不用擔(dān)心你載體上的BamHI酶切位點(diǎn)的干擾了，這樣一來(lái)整個(gè)含有你的片段的質(zhì)粒上就只有一個(gè)BamHI位點(diǎn)了，完全沒(méi)有隱患。 測(cè)序費(fèi)錢也不多，一個(gè)反應(yīng)就30塊錢而已，但可以測(cè)定超過(guò)600bp。 而且要雙向測(cè)通，因?yàn)闇y(cè)序是兩端不準(zhǔn)的，從單鏈得到的結(jié)果可能含有不準(zhǔn)的區(qū)間，需要從另一條單鏈測(cè)得的結(jié)果來(lái)拼接。 |
4樓2011-07-05 19:45:03
friya0910
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 19.4
- 散金: 360
- 帖子: 401
- 在線: 77.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1073675
- 注冊(cè): 2010-08-12
- 專業(yè): 作物分子育種
5樓2011-07-05 19:57:04
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿華中農(nóng)業(yè)071010，總分320求調(diào)劑 +5 | 困困困困坤坤 2026-03-20 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 十三加油 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +6 | lucky呀呀呀鴨 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +6 | shansx 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | Auroracx 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +4 | NIFFFfff 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工306 +4 | z1z2z3879 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 廣西大學(xué)材料導(dǎo)師推薦 +3 | 夏夏夏小正 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | shxchem 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)學(xué)碩080502 337求調(diào)劑-一志愿華中科技大學(xué) +4 | 順順順mr 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +3 | Jack?k?y 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +9 | 梁梁校校 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)，080502，354分求調(diào)劑 +5 | 守候夕陽(yáng)CF 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +8 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿南京航空航天大學(xué)289分 +3 | @taotao 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[論文投稿]
申請(qǐng)回稿延期一個(gè)月，編輯同意了。但系統(tǒng)上的時(shí)間沒(méi)變，給編輯又寫(xiě)郵件了，沒(méi)回復(fù)
 10+3
|
wangf9518 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專利，省、國(guó)級(jí)證書(shū)40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 陌宸希 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|