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bdchengli木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
切口酶用量問(wèn)題
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空谷幽風(fēng)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5, EPI+1): 個(gè)別酶的活力定義不一樣，樓主還需看說(shuō)明書(shū)。 2011-07-22 12:03:36
bdchengli(金幣+5): 2011-07-22 15:55:31
西瓜(金幣+5, EPI+1): 個(gè)別酶的活力定義不一樣，樓主還需看說(shuō)明書(shū)。 2011-07-22 12:03:36
bdchengli(金幣+5): 2011-07-22 15:55:31
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內(nèi)切酶的一般用量是1ul酶切大約1ugDNA，當(dāng)然有些時(shí)候需要加大酶的用量： （1）如果DNA內(nèi)含有多個(gè)你所要酶切的酶切位點(diǎn)，那么你需要加大用量（道理很簡(jiǎn)單，不用解釋） （2）雙酶切時(shí)一種酶在公用buffer里面活性在80%一下 （3）經(jīng)以前驗(yàn)證，這種酶較其他酶活性低的，一般不常用的酶（稀缺一點(diǎn)的）會(huì)出現(xiàn)這種情況 |
2樓2011-07-22 10:43:13
bdchengli
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3樓2011-07-22 10:50:40
zlu520
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4樓2011-07-22 11:03:56
空谷幽風(fēng)
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜(金幣+4): Good！ 2011-07-22 16:53:25
西瓜(金幣+4): Good！ 2011-07-22 16:53:25
| 影響酶切活性的因素有許多，概略的說(shuō)可分為外因和內(nèi)因。外因是可預(yù)見(jiàn)和控制的，如反應(yīng)條件、底物的純度（是否有雜質(zhì)、是否有鹽酚的污染）、何時(shí)加酶、操作是否恰當(dāng)、反應(yīng)體積的選擇以及反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短等等。內(nèi)因包括位點(diǎn)偏愛(ài)性、甲基化底物、底物的構(gòu)象。構(gòu)象的影響主要指切割線性 DNA 和超螺旋 DNA 時(shí)的活性，如與切割 lDNA 相比， EcoRⅠ、PstⅠ、SalⅠ 需要至少 2.5-10 倍的酶來(lái)切割 pBR322 的超螺旋 DNA 。 PaeRTⅠ 與 XhoⅠ 切割相同的序列（C↓TCGAG），但如果 5' 端為 CT 則 PaeRTⅠ 不能切割。 |
5樓2011-07-22 12:38:35
bdchengli
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6樓2011-07-22 15:54:23
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