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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 切口酶用量問題
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bdchengli木蟲 (小有名氣)
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[求助]
切口酶用量問題
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| 我的實驗設計是在發(fā)卡結構的分子信標上設計了兩個酶切位點，為什么我的切口酶用量要非常大才能出現(xiàn)象，是以前用量的4倍甚至更多 |
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 Aptamer_Biosensor | 【分子生物】EPI帖 |
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zlu520
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4樓2011-07-22 11:03:56
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2樓2011-07-22 10:43:13
bdchengli
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3樓2011-07-22 10:50:40
空谷幽風
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+4): Good！ 2011-07-22 16:53:25
西瓜(金幣+4): Good！ 2011-07-22 16:53:25
| 影響酶切活性的因素有許多，概略的說可分為外因和內因。外因是可預見和控制的，如反應條件、底物的純度（是否有雜質、是否有鹽酚的污染）、何時加酶、操作是否恰當、反應體積的選擇以及反應時間的長短等等。內因包括位點偏愛性、甲基化底物、底物的構象。構象的影響主要指切割線性 DNA 和超螺旋 DNA 時的活性，如與切割 lDNA 相比， EcoRⅠ、PstⅠ、SalⅠ 需要至少 2.5-10 倍的酶來切割 pBR322 的超螺旋 DNA 。 PaeRTⅠ 與 XhoⅠ 切割相同的序列（C↓TCGAG），但如果 5' 端為 CT 則 PaeRTⅠ 不能切割。 |
5樓2011-07-22 12:38:35
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