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sipin210新蟲 (初入文壇)
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[求助]
【求助/交流】酶切后的粘性末端補(bǔ)平
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最近在改造載體，想先將基礎(chǔ)載體酶切，得到粘性末端，然后用takara的dna blunting kit補(bǔ)平，再進(jìn)行平端的連接。做了一次，沒有篩到陽(yáng)性克隆。請(qǐng)問大家有blunting的經(jīng)驗(yàn)嗎？ 還有，我可不可以將高保真酶和酶切回收產(chǎn)物72度共浴，從而利用高保真酶的3‘-5’外切酶活性把粘性末端切平呀？ |
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shaquila
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4樓2011-08-09 13:43:32
空谷幽風(fēng)
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2樓2011-08-08 12:15:44
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【答案】應(yīng)助回帖
sipin210(金幣+1): thx~很有用，很多想法我都會(huì)試試看能不能成功~ 2011-08-09 10:08:09
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lz是那端突出，你考慮用哪種酶不僅僅要考慮是否有活性，還要考慮活性的大小，不同酶的外切酶活性有的是針對(duì)粘端，有的是針對(duì)平端，有的甚至內(nèi)凹也能切～～～ lz關(guān)于自連可以看看這個(gè) http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=2941363 |
3樓2011-08-09 09:25:04
sipin210
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5樓2011-08-12 11:06:28
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