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lsx08

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[求助] RP-HPLC分離蛋白質(zhì)

我現(xiàn)在在做用RP-HPLC分離蛋白質(zhì)，分離效果一直不理想（見(jiàn)譜圖），已嘗試多種流動(dòng)相，結(jié)果是目標(biāo)峰與前面的雜峰分離不開(kāi)，達(dá)不到基線分離，希望各位高手可以指導(dǎo)一下，十分謝謝！色譜條件:C18色譜柱（4.6×250mm,300A）;流動(dòng)相是0.1%三氟乙酸水和0.1%三氟乙酸乙腈;檢測(cè)波長(zhǎng)228nm，采用梯度洗脫。

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1樓 2011-08-15 12:30:34

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simber

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adslye(金幣+1): 鼓勵(lì)交流，祝順利！ 2011-08-15 17:55:36

雖然不知道，幫頂。感覺(jué)目標(biāo)峰拖尾很長(zhǎng)，是不是考慮換根色譜柱試試看。

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2樓2011-08-15 15:33:06

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szxy520

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【答案】應(yīng)助回帖

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adslye(金幣+1): 鼓勵(lì)交流~祝順利！ 2011-08-15 17:55:22
lsx08(金幣+2): 謝謝回復(fù)，我嘗試一下。 2011-08-16 09:21:57

可以延長(zhǎng)時(shí)間試試，或者在雜峰和目的峰時(shí)減緩梯度變化，來(lái)達(dá)到分離效果。

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3樓2011-08-15 16:09:55

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引用回帖:

2樓: Originally posted by simber at 2011-08-15 15:33:06:
雖然不知道，幫頂。感覺(jué)目標(biāo)峰拖尾很長(zhǎng)，是不是考慮換根色譜柱試試看。

嗯，謝謝回復(fù)交流！

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4樓2011-08-16 09:19:40

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梧桐如雪

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【答案】應(yīng)助回帖

lsx08(金幣+2): 謝謝回帖，請(qǐng)問(wèn)你們后來(lái)買的什么牌子的離子柱？ 2011-08-17 08:37:28

雖然我不懂，但我們公司以前出現(xiàn)過(guò)這種狀況，買了根離子柱，分開(kāi)了，呵呵。

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5樓2011-08-16 22:25:24

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樓上說(shuō)的對(duì)�？梢钥紤]換根其他的柱子。SEC

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6樓2011-09-02 11:25:07

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labrat

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Better solution is to change column to SEC column, else can try this combination for hydrophobic protein:
Buffer A: water, 50% formic acid
Buffer B: isopropanol, 5% formic acid
Gradient: 0-100% A to B

some use acetonitrile, you can try combination.

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lsx08

7樓2011-09-02 17:16:16

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引用回帖:

7樓: Originally posted by labrat at 2011-09-02 17:16:16:
Better solution is to change column to SEC column, else can try this combination for hydrophobic protein:
Buffer A: water, 50% formic acid
Buffer B: isopropanol, 5% formic acid
Gradient: 0-100% ...

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8樓2011-09-03 13:25:44

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zkydc810307

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蛋白的HPLC不要用C18，試試C8或者C4

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把蛋白純化研究成操作工都能干的活

9樓2012-08-08 13:55:21

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