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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » pcr加樣順序
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[交流]
pcr加樣順序 已有2人參與
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鄙人用的是：無菌水--buffer---Mg離子---模板--上游引物 - 下游引物--dNTP--Taq酶。 不知道有沒有最優(yōu)的加樣順序？ 另外：操作時要在冰上么？為什么呢？ |
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3樓2011-08-19 11:12:38
roomofxw
木蟲 (正式寫手)
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
dhd997(金幣+3): good 2011-08-19 12:02:40
西瓜(金幣+2, MolEPI+1): 補上！ 2011-08-19 18:40:52
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
dhd997(金幣+3): good 2011-08-19 12:02:40
西瓜(金幣+2, MolEPI+1): 補上！ 2011-08-19 18:40:52
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那就是把除了引物，模板以外的所有一樣的東西先混好，然后分裝再加模板和引物。或者直接購買PCR MIX. PCR一般很粗獷的，沒什么問題，分開加的話，酶放最后就好了。 在冰上操作是為了凍結酶的活性，防止產(chǎn)生非特性的擴增。當然一般分子生物學操作均最好在冰上操作，比如萬一混入什么核酸酶呀什么的，蛋白酶什么的，冰上也沒什么活性，一加熱就又都失活了。 |
2樓2011-08-19 11:03:18
4樓2011-08-19 15:37:04
5樓2011-08-19 15:43:09
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