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[交流]
pcr加樣順序 已有2人參與
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鄙人用的是：無(wú)菌水--buffer---Mg離子---模板--上游引物 - 下游引物--dNTP--Taq酶。 不知道有沒(méi)有最優(yōu)的加樣順序？ 另外：操作時(shí)要在冰上么？為什么呢？ |
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4樓2011-08-19 15:37:04
roomofxw
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
dhd997(金幣+3): good 2011-08-19 12:02:40
西瓜(金幣+2, MolEPI+1): 補(bǔ)上！ 2011-08-19 18:40:52
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西瓜(金幣+2, MolEPI+1): 補(bǔ)上！ 2011-08-19 18:40:52
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那就是把除了引物，模板以外的所有一樣的東西先混好，然后分裝再加模板和引物�；蛘咧苯淤�(gòu)買(mǎi)PCR MIX. PCR一般很粗獷的，沒(méi)什么問(wèn)題，分開(kāi)加的話(huà)，酶放最后就好了。 在冰上操作是為了凍結(jié)酶的活性，防止產(chǎn)生非特性的擴(kuò)增。當(dāng)然一般分子生物學(xué)操作均最好在冰上操作，比如萬(wàn)一混入什么核酸酶呀什么的，蛋白酶什么的，冰上也沒(méi)什么活性，一加熱就又都失活了。 |
2樓2011-08-19 11:03:18
3樓2011-08-19 11:12:38
5樓2011-08-19 15:43:09
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