 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2926 | 回復(fù): 13 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 BioEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||||
寂寞強(qiáng)強(qiáng)銅蟲 (正式寫手)
|
[求助]
提質(zhì)粒遇到問題
|
|||
|
今天用試劑盒提取質(zhì)粒，結(jié)果上午提質(zhì)粒后用3ul樣品+1ulbuffer跑膠6組都能發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒，我們組的最清晰（第一張圖的marker左邊第二條帶），下午酶切（大概2-2.5h）后把載體的酶切產(chǎn)物（100ul體系+20ul 6*buffer）跑膠結(jié)果都沒有發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒的條帶。大家說說是怎么回事呢？難道是Buffer加多了，還是酶切出問題了？ 還有，昨天提質(zhì)粒的時候，一格marker一格質(zhì)粒，我們組跑膠時間比較長，質(zhì)粒那條帶在遷移過程中有一些不明顯的條帶在10000bp的地方有個模糊的條帶，這個可能是什么？怎么會有這個東西 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
11408軟件工程求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿211 初試270分 求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
300求調(diào)劑，材料科學(xué)英一數(shù)二
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
學(xué)碩274求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
本科雙非材料，跨考一志愿華電085801電氣，283求調(diào)劑，任何專業(yè)都可以
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
316求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
322求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 做酶切連接后轉(zhuǎn)化再提質(zhì)粒，質(zhì)粒明顯變小，Why???
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌野生菌中驗證遇到的非常非常怪的問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 提質(zhì)粒出現(xiàn)4條帶？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 提質(zhì)粒的問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 請教大家一個問題--提質(zhì)粒
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】提質(zhì)粒遇到的問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】片段轉(zhuǎn)進(jìn)去，提質(zhì)粒酶切發(fā)現(xiàn)載體小了，想不明白
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助/交流】求指點(diǎn)——提質(zhì)粒的問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】為何提不出質(zhì)粒來
已經(jīng)有12人回復(fù)
cexoihtydx
金蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 12
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 581.3
- 散金: 906
- 紅花: 5
- 帖子: 766
- 在線: 263.3小時
- 蟲號: 722752
- 注冊: 2009-03-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 人類遺傳學(xué)
2樓2011-08-26 21:33:46
wanhscn
木蟲 (職業(yè)作家)
哲學(xué)@草根
- 應(yīng)助: 53 (初中生)
- 貴賓: 0.87
- 金幣: 3895.7
- 散金: 877
- 紅花: 27
- 沙發(fā): 14
- 帖子: 3642
- 在線: 526.2小時
- 蟲號: 1376762
- 注冊: 2011-08-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
3樓2011-08-26 21:54:16
wanhscn
木蟲 (職業(yè)作家)
哲學(xué)@草根
- 應(yīng)助: 53 (初中生)
- 貴賓: 0.87
- 金幣: 3895.7
- 散金: 877
- 紅花: 27
- 沙發(fā): 14
- 帖子: 3642
- 在線: 526.2小時
- 蟲號: 1376762
- 注冊: 2011-08-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
4樓2011-08-26 21:55:21
寂寞強(qiáng)強(qiáng)
銅蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1180.9
- 散金: 177
- 紅花: 7
- 帖子: 390
- 在線: 203.5小時
- 蟲號: 944032
- 注冊: 2010-01-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 化學(xué)環(huán)境污染與健康
5樓2011-08-26 23:21:34
寂寞強(qiáng)強(qiáng)
銅蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1180.9
- 散金: 177
- 紅花: 7
- 帖子: 390
- 在線: 203.5小時
- 蟲號: 944032
- 注冊: 2010-01-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 化學(xué)環(huán)境污染與健康
6樓2011-08-26 23:23:58
寂寞強(qiáng)強(qiáng)
銅蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1180.9
- 散金: 177
- 紅花: 7
- 帖子: 390
- 在線: 203.5小時
- 蟲號: 944032
- 注冊: 2010-01-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 化學(xué)環(huán)境污染與健康
7樓2011-08-26 23:26:07
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專家經(jīng)驗: +248 - BioEPI: 73
- 應(yīng)助: 257 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19474.4
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6590
- 在線: 2778小時
- 蟲號: 856414
- 注冊: 2009-09-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
- 管轄: 微生物
★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金幣+5): 熱心的娃 2011-08-27 10:42:21
lstt09nk(金幣+5): 熱心的娃 2011-08-27 10:42:21
|
3微升電泳條帶才那么窄那么暗，說明你的質(zhì)粒濃度低，酶切的時候是要加緩沖液和水的，如果質(zhì)粒加得少，就很容易被稀釋了�？茨愕膱D片，膠孔應(yīng)該是小的，看你的膠，直覺應(yīng)該不是薄的，那么你的一個膠孔大概能上10微升，你酶切的時候用100微升的體系，那么要保證能看的到條帶，你切質(zhì)粒30微升比較保險，你是切多少微升的？酶切體系沒必要那么大，20微升體系就行了，過多了就把質(zhì)粒稀釋了，還浪費(fèi)酶。 你的ladder很詭異，為什么在靠近膠孔的地方有一條帶？是不是ladder臟了導(dǎo)致跑的速度不均一？ 第二張圖，是不是前面幾個膠孔上的樣品沒有提取得到質(zhì)粒？看起來是有RNA的，說明細(xì)胞已經(jīng)破碎了，是不是手工提取的？第一張圖中沒有RNA，可以對比一下。至于那個模糊的帶，是有點(diǎn)像基因組的DNA，也像質(zhì)粒的復(fù)制中間體。 |
8樓2011-08-26 23:53:06
cexoihtydx
金蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 12
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 581.3
- 散金: 906
- 紅花: 5
- 帖子: 766
- 在線: 263.3小時
- 蟲號: 722752
- 注冊: 2009-03-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 人類遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
寂寞強(qiáng)強(qiáng)(金幣+1): 很感謝啊，那么熱心，回答的很詳細(xì) 2011-08-27 07:51:02
lstt09nk(BioEPI+1): 2011-08-27 10:43:14
lstt09nk(BioEPI+1): 2011-08-27 10:43:14
|
分析： 1.TOP10菌株中的質(zhì)粒應(yīng)是高拷貝，質(zhì)粒多。3ml菌液用于提取質(zhì)粒即可。過夜搖菌時間不要超過12小時為宜，不然菌株老化，影響質(zhì)粒提取。 2.最后一步加水洗脫，可加入50℃預(yù)熱的無菌水30ul洗過柱子，也可少量多次洗脫（如：15ul,洗脫兩次），這樣能提高洗脫效率。 3.成功提取的質(zhì)粒，電泳檢查常出現(xiàn)3條條帶，為質(zhì)粒的3種形態(tài)，環(huán)狀質(zhì)粒電泳速度最快，開環(huán)的最慢，屬于正�，F(xiàn)象。 4.個人質(zhì)粒酶切常用50ul體系,30ul質(zhì)粒，加上內(nèi)切酶和buffer,雙酶切時注意是否具有共用buffer，是否需要加入BSA，兩個酶最適酶切溫度是否均為37℃（有些酶最適30℃）。 5.100ul酶切體系太大，浪費(fèi)試劑的同時，更影響下不的切膠回收，膠塊越大，切膠回收效率越低 6.當(dāng)質(zhì)�；駾NA濃度較低時，電泳時間不能太長，展開距離，離點(diǎn)樣孔最好不要超過2cm，否定常�？床坏侥康臈l帶。 個人認(rèn)為，問題出現(xiàn)在上游的質(zhì)粒提取部分，可重新?lián)u菌提取質(zhì)粒（注意操作）。 祝你成功！ |
9樓2011-08-27 00:25:11
cexoihtydx
金蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 12
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 581.3
- 散金: 906
- 紅花: 5
- 帖子: 766
- 在線: 263.3小時
- 蟲號: 722752
- 注冊: 2009-03-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 人類遺傳學(xué)
10樓2011-08-27 00:31:25
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 寂寞強(qiáng)強(qiáng) 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 315求調(diào)劑 +4 | akie... 2026-03-28 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)材料與化工（085600）296求調(diào)劑 +11 | 稻妻小編 2026-03-26 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調(diào)劑 +8 | AZMK 2026-03-25 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | 璞玉~~ 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工272求調(diào)劑 +9 | 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 346求調(diào)劑 一志愿070303有機(jī)化學(xué) +3 | 蘿卜燉青菜 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +8 | 超級伊昂大王 2026-03-24 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +10 | 呼呼？~+123456 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 | Russ_ss 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學(xué)，080500學(xué)碩，總分317分求調(diào)劑 +4 | 舉個栗子oi 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 349求調(diào)劑 +4 | 李木子啊哈哈 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 352求調(diào)劑 +4 | 大米飯！ 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 打過很多競賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3 | askeladz 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 李李不服輸 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[有機(jī)交流]
 有機(jī)合成求助
 20+3
|
FENGSHUJEI 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 080500求調(diào)劑 +3 | zzzzfan 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑 +7 | jhybd 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 361求調(diào)劑 +3 | Glack 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | Zhangbod 2026-03-21 | 7/350 |
|