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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 求從組織中提取DNA的方法
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YJD落葉梧桐新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求從組織中提取DNA的方法 已有2人參與
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| 求從組織中提取DNA詳細一點的步驟，謝謝了 |
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你是路人甲
銅蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 微生物遺傳育種學
【答案】應助回帖
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1.取出析出液和洗滌液，按以下操作： a) BIOG析出液：21mL加入9mL無水乙醇，混勻；42mL加入18mL無水乙醇，混勻。 b) BIOG洗滌液：9mL加入21mL無水乙醇，混勻；18mL加入42mL無水乙醇，混勻。 c) 配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀，可在37℃溶解，搖勻后使用。 2.取10-20mg左右的組織，用液氮研磨為粉末，轉(zhuǎn)入1.5mL 離心管內(nèi)，加入100 μL 生理鹽水（或直接在100 μL 生理鹽水中將組織勻漿為細胞懸液），振蕩15秒；加入200 μL 裂解液， 20μL消化液A，振蕩混勻，室溫放置5分鐘。 3.加入20 μL 消化液B，充分混勻；56℃水浴60分鐘至組織完全消化，5000rpm離心5分鐘，將上清吸至1.5mL 離心管。 4.加入200μL無水乙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響DNA的提取與后續(xù)實驗。 5.將吸附柱放入收集管內(nèi)，將上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi)，靜置2 分鐘，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。 6.將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL 洗滌液A至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。 7.將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL 洗滌液B至吸附柱內(nèi)，靜置2 分鐘，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。 8.將吸附柱放回收集管內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心2 分鐘，離去殘留的洗滌液。 9.取出吸附柱，放入新的1.5 mL 離心管內(nèi)，加入50-200 μL洗脫液，靜置3分鐘，12,000 rpm 4℃ 離心2分鐘，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步實驗或-20℃保存。 |
2樓2019-09-26 15:16:58
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2019-09-26 15:29:39
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