造血干細(xì)胞

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[交流] 一個(gè)關(guān)于感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率的問題

無論是電轉(zhuǎn)還是化學(xué)轉(zhuǎn)化，多少的轉(zhuǎn)化率才是達(dá)到了理想值，既是涂板培養(yǎng)12小時(shí)后菌落數(shù)量達(dá)到多少？我之前做得都是化學(xué)法培養(yǎng)2天也就出那么3幾個(gè)，最近做了超級感受態(tài)，也用了電轉(zhuǎn)，12小時(shí)之后就能長出來8個(gè)了，老師還嫌感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率低，求解�！斗肿涌寺　飞险f電轉(zhuǎn)的效率有10的7次方~10的8次方,那么這個(gè)7次方8次方是怎么得到的？在平板上是個(gè)怎么樣的表現(xiàn)？

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1樓 2011-09-05 14:07:09

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linqin1029

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如果你要確定感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率，可將一定量的完整質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞中，取一部分轉(zhuǎn)化的細(xì)菌，涂布到選擇培養(yǎng)基上，可用菌落生長單位/μg DNA，按下面的方法計(jì)算感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。計(jì)算公式：轉(zhuǎn)化效率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA的總量。

例如，取1μl（0.1ng/μl）完整的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化100μl的感受態(tài)細(xì)胞。向轉(zhuǎn)化反應(yīng)液中加入900μl培養(yǎng)液，讓細(xì)菌恢復(fù)一小段時(shí)間，取100μl鋪板.培養(yǎng)過夜，產(chǎn)生1000個(gè)菌落。轉(zhuǎn)化0.1ng DNA，用SOC稀釋到1000μl后，取1/10涂平板，則涂平板共用0.01ng DNA 質(zhì)粒，所以轉(zhuǎn)化率＝1000克隆/0.01ng DNA =105cfu/ng=10的8次方cfu/μg。

一般轉(zhuǎn)化效率1×10的6次方cfu/μg DNA可滿足普通的亞克隆實(shí)驗(yàn)；1×10的7次方cfu/μg DNA用于作更復(fù)雜的亞克隆，有限量的DNA的轉(zhuǎn)化，T-克隆實(shí)驗(yàn)；構(gòu)建文庫和突變要求用的轉(zhuǎn)化的效率為>1×10的8次方cfu/μg DNA。

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冰風(fēng)顫木

11樓2011-09-09 10:14:13

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天使托

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造血干細(xì)胞(金幣+1):謝謝參與
dhd997(金幣+2): 有時(shí)候還不是想穩(wěn)點(diǎn) 2011-09-06 07:37:24

有時(shí)候長太多并不是一件好事情。。。。十幾個(gè)，幾個(gè)就OK了。。。
哪怕只有一個(gè)，只要對就OK！�。�

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2樓2011-09-05 15:50:43

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linlingdaiyu

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dhd997(金幣+5): 鼓勵(lì)新蟲交流 2011-09-06 07:37:42

我的感受態(tài)效率都挺高的啊

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3樓2011-09-05 21:38:21

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dhd997(金幣+3): good 2011-09-06 07:37:52

是啊，只要有菌落就好，沒必要那么多，我做的轉(zhuǎn)化效率挺高的，我同門做的轉(zhuǎn)化率就比較低，但是救過是一樣的啊！

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4樓2011-09-05 22:14:58

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西瓜: 一般可以看1ng質(zhì)粒（你可以用本實(shí)驗(yàn)室最常用的那個(gè)質(zhì)粒）轉(zhuǎn)化后可以得到多少菌落。你第一次做覺得菌落很多數(shù)不過來，第二次做就可以稀釋10倍、100倍或者更高。數(shù)的時(shí)候，可以把平板分成4份或者更多（前提是涂布比較均勻），然后只數(shù)其中一份的菌落數(shù)。最后計(jì)算下就ok了。 2011-09-08 22:10:22

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3樓: Originally posted by linlingdaiyu at 2011-09-05 21:38:21:
我的感受態(tài)效率都挺高的啊

問題是：多少算高？那個(gè)10的7-8次方在板上怎么看，求解

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5樓2011-09-06 09:13:13

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2樓: Originally posted by 天使托 at 2011-09-05 15:50:43:
有時(shí)候長太多并不是一件好事情。。。。十幾個(gè)，幾個(gè)就OK了。。。
哪怕只有一個(gè)，只要對就OK！�。�

我已經(jīng)做出來了，但老師說轉(zhuǎn)化效率不行，一直在重復(fù)做感受態(tài)

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6樓2011-09-06 09:14:33

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sfb1020

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dhd997(金幣+2): good 2011-09-09 07:55:25

轉(zhuǎn)化效率高的可以長滿滿一板菌，連單菌落也挑不出來。要是那種轉(zhuǎn)化效率高的涂板的時(shí)候就要少涂點(diǎn)

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7樓2011-09-06 09:42:10

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wanhscn

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6樓: Originally posted by 造血干細(xì)胞 at 2011-09-06 09:14:33:
我已經(jīng)做出來了，但老師說轉(zhuǎn)化效率不行，一直在重復(fù)做感受態(tài)

會(huì)不會(huì)老板對你要求期望要比其他人高。一般老板對不同學(xué)生要求不同！

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8樓2011-09-06 10:52:56

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荊荊

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dhd997(金幣+2): 鼓勵(lì)經(jīng)驗(yàn)交流 2011-09-09 07:55:45

我?guī)熜衷f把平板平分成十個(gè)左右的扇形，粗略數(shù)一下單菌落數(shù)以此估計(jì)平板單菌落數(shù)，菌落也不能長太多，以免挑取時(shí)困難。

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9樓2011-09-08 21:48:06

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sayfxxk2u

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5樓: Originally posted by 造血干細(xì)胞 at 2011-09-06 09:13:13:
問題是：多少算高？那個(gè)10的7-8次方在板上怎么看，求解

10的7-8次方一般是指轉(zhuǎn)化1ng的pUC-19質(zhì)粒，在板子上長的菌落數(shù)達(dá)到10的7-8次方。轉(zhuǎn)化的時(shí)候，最后一步不離心后涂板，可以取出的菌液稀釋，而不進(jìn)行離心，然后涂板。然后可以計(jì)算你原先轉(zhuǎn)化成功的感受態(tài)細(xì)胞有多少。

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10樓2011-09-09 00:31:30

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送紅花一朵

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11樓: Originally posted by linqin1029 at 2011-09-09 10:14:13
如果你要確定感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率，可將一定量的完整質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞中，取一部分轉(zhuǎn)化的細(xì)菌，涂布到選擇培養(yǎng)基上，可用菌落生長單位/μg DNA，按下面的方法計(jì)算感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。計(jì)算公式：轉(zhuǎn)化效率＝產(chǎn) ...

回復(fù)的很好謝謝了啊學(xué)習(xí)了啊

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12樓2013-06-10 16:15:11

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