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chenzhenwei0銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于斑點(diǎn)檢測抗體來源，做免疫印跡做不下去了，會不會是一抗出問題了？
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我用的二抗是HRP標(biāo)記的兔抗牛，但是一抗最初說是牛源的，但是后來感覺不太可靠，實(shí)驗(yàn)怎么都沒有結(jié)果。目前通過試劑說明知道一抗可能是牛、兔、羊的，后來想到用DOT實(shí)驗(yàn)來檢測血清來源以進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，因此有買了二抗兔和羊的（由于一抗不好買其他的），但是經(jīng)過幾次的發(fā)現(xiàn)，羊的二抗有顯色反應(yīng)，但是也不很明顯, 以下是我的操作方法，請高手指教，謝謝了哈 第一步：將標(biāo)準(zhǔn)陽性血清分別滴于三小塊NC膜中央，使充分干燥,蛋白完全粘附與NC膜上，約1h。 第二步： 分別將膜放置于封閉盒中，用20ml含5%脫脂奶粉的PBST封閉1h，傾去封閉液，用PBST對膜稍作漂洗1次30s 第四步： 分別于膜中央滴加二抗辣根辛過氧化物標(biāo)記的兔抗牛、兔抗羊、羊抗兔40ul, 再用含1%脫脂奶粉的PBST進(jìn)行孵育1h,孵育二抗后用PBST潤洗三次。 第五步： 用小鑷子分別將膜從封閉盒取出，置于小平皿中，滴加臨時配制的DAB進(jìn)行顯色10min。 是不是操作有問題，感覺結(jié)果不理想啊 [ Last edited by 1949stone on 2011-9-6 at 10:41 ] |
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7樓2012-03-05 10:55:01
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3樓2011-11-24 17:20:42
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4樓2012-03-03 17:04:50
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