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gongeleven鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
PCR驗(yàn)證穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染進(jìn)去的基因序列
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最近要驗(yàn)證一下穩(wěn)轉(zhuǎn)株內(nèi)是否整合了正確的基因序列， 有人說得抽提RNA作RT-PCR。 有沒有什么好的辦法把細(xì)胞簡單處理，使基因組DNA游離出來作為模板，用特異性引物直接PCR？有人這么成功過嗎。 |
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asznpb
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4樓2011-09-29 10:42:54
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2樓2011-09-29 09:46:42
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3樓2011-09-29 10:36:10
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【答案】應(yīng)助回帖
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adslye(金幣+2): 很耐心~鼓勵~ 2011-09-29 13:35:01
gongeleven(金幣+1): 謝謝。以后試試，不過這次來不及訂購新試劑了。。 2011-09-29 14:08:49
gongeleven(金幣+2): 2012-02-22 10:31:22
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gongeleven(金幣+1): 謝謝。以后試試，不過這次來不及訂購新試劑了。。 2011-09-29 14:08:49
gongeleven(金幣+2): 2012-02-22 10:31:22
| 因?yàn)槟惚旧砭褪菫榱蓑?yàn)證插入序列是否正確的插入，所以，做southern的探針就是用你的插入序列的一部分做的，雜交有結(jié)果說明插入序列整合到了基因組上，完了你在拉側(cè)翼序列，拿到插入序列兩端的序列，再返回拉一下就知道是否完全插入正確了……或者你直接做敲除互補(bǔ)也能驗(yàn)證 |
5樓2011-09-29 10:45:53
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