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小丫的維尼熊木蟲 (小有名氣)
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[交流]
普通PCR基因組出現(xiàn)非特異性擴增帶解決對策 已有1人參與
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PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預計的大小不一致，或大或小，或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶與非特異性擴增帶。 1 原因 一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。 二是Mg2+離子濃度過高、 退火溫度過低， 及PCR循環(huán)次數(shù)過多有關。 其次是酶的質和量，往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn)， 酶量過多有時也會出現(xiàn)非特異性擴增。 2 對策 ①必要時重新設計引物。 ②減低酶量或調換另一來源的酶。 ③降低引物量，適當增加模板量，減少循環(huán)次數(shù)。 ④適當提高退火溫度或采用二溫度點法(93℃變性，65℃左右退火與延伸)。 生物一一四 |
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